[发明专利]液相色谱分离制备中药附子中主要酯型生物碱的方法

权利要求书

1.一种液相色谱分离制备中药附子中主要酯型生物碱的方法，从中药附子中分离制备主要酯型生物碱，在分析色谱基础上采用线性放大并优化，建立制备色谱，对中药附子中主要酯型生物碱进行分离制备，其特征在于：

在所述的分析色谱及制备色谱中，色谱柱中的固定相均为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相均为有机相-醋酸盐缓冲体系，所述的有机相占流动相比例为20～70％，有机相为甲醇或乙腈，所述的醋酸盐缓冲体系为醋酸铵-醋酸缓冲体系，检测波长为230～240nm，用流动相溶解并稀释中药附子总生物碱粗提物作为分析色谱和制备色谱的供试品，其中，

分析色谱中，供试品以流动相溶解、稀释成质量浓度为0.6～1.2g·mL^-1，进样体积为10～30μL，流动相流速为0.4～1.0mL·min^-1；

制备色谱中，进样浓度为0.8～1.0g·mL^-1，至少进样量为分析色谱进样量乘以相应线性放大系数，其中，线性放大系数按下式计算：

Sf＝π(Dp)²/π(Da)²＝(Dp/Da)²

式中：Sf为线性放大系数；Dp为制备色谱柱内径；Da为分析色谱柱内径；

供试品经制备色谱分别收集得到的各主要酯型生物碱流分，先以15～30℃温度旋转蒸发浓缩，后以冷冻干燥机冷冻干燥制得。

2.根据权利要求1所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：所述的有机相占流动相体积百分比为30～60％。

3.根据权利要求2所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：所述的有机相占流动相体积百分比为36～52％。

4.根据权利要求1所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：分析色谱中，进样体积20μL，进样浓度为1.2g·mL^-1，流动相流速为0.6mL·min^-1。

5.根据权利要求1所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：制备色谱中，进样体积为20～100mL。

6.根据权利要求1所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：所述的醋酸铵-醋酸缓冲体系中，醋酸铵的摩尔浓度为10～40mmol/L，以醋酸调节有机相-醋酸盐缓冲体系的pH值为5.0～7.0。

7.根据权利要求1所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：所述中药附子总生物碱粗提物的制备方法为：将附子粉碎成粗粉，取粗粉置于锥形瓶中，粗粉以浓氨水润湿，静置20～40min，加200mL无水乙醚，超声处理8～15min，于2～5℃低温冷藏至少24h，过滤，用无水乙醚少量多次洗涤残渣，合并滤液及洗涤液，旋转蒸发至干，以稀盐酸溶液溶解转移出，以氨试液调pH值为4.8～5.2，用D101树脂柱吸附，按顺序以1倍树脂柱体积的水、2倍树脂柱体积的40％乙醇、8倍树脂柱体积的70％乙醇、3倍树脂柱体积的95％乙醇，进行梯度洗脱，收集70％乙醇洗脱液于旋转蒸发仪蒸至近干，转移至培养皿，30～40℃真空干燥至恒重。

8.根据权利要求1所述的从中药附子中分离制备主要酯型生物碱的方法，其特征在于：所述的浓缩过程为：将各生物碱流分以15～30℃温度旋转蒸发浓缩；所述的冷冻过程为：用冷冻干燥机在-40～-30℃预冻4～6小时，抽真空，压力不大于25Pa，再在-20～-15℃保持4～6小时，最后升温干燥至20～25℃保持4～6小时。