[发明专利]一种检测土壤中乙酰氧肟酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及土壤中乙酰氧肟酸含量的检测，特别是利用分光光度法检测土壤中乙酰氧肟酸含量的方法。

背景技术

现代农业中由于氮肥的大量施用导致了较低的氮肥利用效率，同时引起了一系列的环境污染问题，如大气污染、水污染。为了提高氮肥的利用效率和减少环境污染，人们研究了各种途径来提高氮肥的利用效率。脲酶抑制剂的应用就是一个非常有前景的方向。乙酰氧肟酸(AHA)就是最早研究的脲酶抑制剂之一，它在提高氮肥利用效率和减轻环境氮污染方面发挥了很重要的作用；为了更好得了解其在土壤中的基本特性和肥效期，检测土壤中乙酰氧肟酸的含量就显得非常必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测土壤中乙酰氧肟酸含量的方法。该方法减化了样品的提取过程和试验的操作步骤，使分析结果更加精确可靠，分析重现性更好。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种检测土壤中乙酰氧肟酸含量的方法，

1)称取5.0000～10.0000g土样(过1mm筛)置于100mL烧杯中，加入40-80mL去离子水，振荡使土样充分散开，过滤，沉淀用20-50mL去离子水2-10次洗涤，收集滤液于100mL容量瓶，定溶，制成待测样品溶液V₁；

2)吸取待测样品溶液V₂、1.0～2.0mL于刻度试管中，加入1-3mL高氯酸铁溶液，加水至5mL，摇荡生成稳定的红色络合物，用分光光度计在420nm下比色，测定吸光度A；

3)工作标准曲线的制备：吸取AHA标准溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL于刻度试管中，加入1-3mL高氯酸铁溶液，加水至5mL，摇荡生成稳定的红色络合物，同样品一起420nm下比色测定吸光度A’；

以一系列标准溶液中的AHA含量(0.2mg/L，0.4mg/L，0.6mg/L，0.8mg/L)与吸光度A’制作工作标准曲线，得到斜率b；

4)根据吸光值A和斜率b，计算吸取待测样品中的AHA含量S，S＝A*b；

5)计算样品中AHA的含量：(S*V₁)/(V₂*m*1000)*100％

其中，S为对应标准曲线查得的AHA含量(mg)；V₁为待测样品的体积(mL)；V₂为吸取待测样品的体积(mL)；m为称取干土的质量(g)；1000为换算系数。

实验中所用的水均为去离子水，所用试剂都是分析纯；待测溶液中AHA的含量在0.16～0.25mg/mL之间。

本发明是将土壤中的乙酰氧肟酸(AHA)加水振荡提取出来，在酸性条件下，乙酰氧肟酸与三价铁离子形成红色化合物，且含量的高低与颜色的深浅成正比，以此为基础利用分光光度法420nm处比色测定吸光度，进而计算土壤中乙酰氧肟酸的含量。本发明优点为：1)简化了操作步骤，；2)方法准确度高，易操作；3)结果稳定可靠，重现性好；4)选择性好，速度快。

具体实施方式

试剂配制：

1.高氯酸铁溶液：在50mL烧杯中，加入10mL 70％高氯酸，分批加入2.0g三氯化铁，并不停搅拌。微热促使完全溶解，待冷却至室温转移到100mL容量瓶中，用适量去离子水淋洗烧杯，并转移到容量瓶中，稀释至刻度。

2.乙酰氧肟酸(AHA)标准溶液：准确称取1.0000g脲酶抑制剂AHA标准品置于1000mL容量瓶中，用去离子水溶解，并稀释至刻度，配成1mg/mL标准溶液。

操作步骤：

1)称取5.0000g土样(过1mm筛)置于100mL烧杯中，加入50mL去离子水，振荡1h使土样充分散开，过滤，沉淀用50mL去离子水多次洗涤，收集滤液于100mL容量瓶，定溶，制成待测样品溶液。待测溶液中AHA的含量在0.16～0.25mg/mL之间；

2)吸取待测样品溶液1.0mL于刻度试管中，加入3mL高氯酸铁溶液，加水至5mL，摇荡生成稳定的红色络合物，用分光光度计在420nm下比色，测定吸光度A；

3)工作标准曲线的制备：吸取AHA标准溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL于刻度试管中，加入3mL高氯酸铁溶液，加水至5mL，摇荡生成稳定的红色络合物，同样品一起420nm下比色测定吸光度A’。以一系列标准溶液中的AHA含量(0.2mg，0.4mg，0.6mg，0.8mg)与吸光度A’制作工作标准曲线，得到斜率b；