[发明专利]一种铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备方法

权利要求书

1.一种铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备方法，其特征在于：

首先在毛细管中以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体，乙叉二甲基丙烯酸乙酯为交联剂，环己醇、十二醇和N，N-二甲基甲酰胺的混合物为致孔剂，偶氮二异丁腈为引发剂聚合而得的多孔整体柱基质；

整体柱基质继而通过表面修饰反应，使其表面键合上含羧基的功能团，以用于后续的铁离子固定；最后通入含铁离子的溶液，实现铁离子的固定化，完成铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

功能单体、交联剂和致孔剂三者之间的质量比例范围为2∶3∶5-2.2∶2.9∶4.9；

致孔剂中环己醇、十二醇和N，N-二甲基甲酰胺三者之间的质量比例范围为76∶9∶15-72∶8∶20；

聚合反应过程为，将反应液通入处理后的熔融石英毛细管中，并立即用硅橡胶封闭毛细管两端，置于52-58℃水浴中反应14-18h，完成基质聚合反应。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

引发剂的用量为功能单体、交联剂和致孔剂三者总质量的0.5-1.0％。

4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述表面修饰反应过程为，在填充了基质材料的毛细管中通入0.02-0.2mol/L的N，N-二羧基甲基-L-赖氨酸溶液，溶液的pH值为8-10.0，在室温下反应0.5-2h，进行基质表面的化学修饰；整体柱基质通过表面修饰反应，使其表面键合上含羧基的功能团，以用于后续的铁离子固定。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

在整体柱基质通过表面修饰反应后，用甲酸体积分数为0.05-0.2％的溶液冲洗基质材料至流出液为酸性。

6.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述铁离子的固定化过程为，在填充了基质材料的毛细管中通入0.05-0.2mol/L的三价可溶性铁盐溶液，实现铁离子的固定化；在室温下，使溶液缓慢流过色谱柱，反应时间0.5-2h。

7.按照权利要求1或6所述的制备方法，其特征在于：制备好的铁离子固定化亲和色谱整体柱用甲酸体积分数为0.05-0.2％的溶液冲洗，去除游离的铁离子。

8.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于：可溶性铁盐为三氯化铁、硝酸铁、硫酸铁或其他可溶于水的三价铁盐中的一种或多种。

9.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：制备得到的铁离子固定化亲和色谱整体柱可用于在线或离线的磷酸化肽段选择性富集分离，使用后的铁离子固定化亲和色谱整体柱可通过重复权利要求6的铁离子的固定化过程实现再生。