[发明专利]美洲帘蛤多糖的制备方法

权利要求书

1.一种美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于依次按以下步骤进行：

a.选取鲜活的美洲帘蛤，洗净后取肉，采用组织捣碎机捣碎，得到蛤肉糜 制品；

b.蛤肉糜制品与水按质量比为1∶1～3匀浆，得到蛤肉糜浆；

c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或碱性蛋白酶或复合蛋白酶，采用1～4N 氢氧化钠或盐酸调节pH，酶解1～5小时，得到蛤肉酶解液A；

d.将得到蛤肉酶解液A采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH，用风味酶进一 步酶解1～3h，得蛤肉酶解液B；

e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶 液，得到蛤肉酶解中和液；

f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3～10％，离心去沉淀后，添加食盐， 使食盐终浓度达到1～2％，得到蛤肉酶解盐溶液；

g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3～7倍体积的无水乙醇，摇匀后，在 1～6℃下静置12～24小时，采用8000～12000转/分钟离心15～30分钟，得到上清 液和沉淀两部分；将沉淀物用丙酮洗涤，用Sevag试剂脱蛋白后，装入截留分 子量为6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；

h.将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱，先用0.02mol/L pH7.4 磷酸盐缓冲液洗脱，再以0～2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为1～2ml/min， 采用苯酚～硫酸法跟踪测定多糖，收集单一糖峰组分；

i.将得到的单一糖峰组分，采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离 纯化，用蒸馏水洗脱，流速为0.2ml/min，采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖，用自 动收集器收集单一糖峰组分；

j.将收集的单一糖峰组分进行浓缩，冻干，即得到美洲帘蛤多糖。

2.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述c步 骤是加入酶活力单位为100万u/g的木瓜蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的4.0～8.0％， 用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0～7.0，在温度为55～60℃条件下酶解1～5h。

3.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述c步 骤是是加入酶活力单位为2.4AU/g的碱性蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的 1.0～1.5％，用1～4N氢氧化钠或盐酸调节pH7.5～8.0，在温度为55～60℃条件下 酶解1～2h。

4.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述c步 骤是加入酶活力单位为1.5AU/g的复合蛋白酶，加酶量为蛤肉质量的1.0～1.5％， 用1～4N盐酸调节pH6.0～6.5，在温度为55～60℃条件下酶解3～5h。

5.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述d步 骤是采用1～4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解液A的pH至6.5～7.0，加入酶活 力500 LAPU/g的风味酶，加酶量为蛤肉质量的0.25～1.0％，在温度为45～50℃ 条件下，酶解1～3h。

6.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法，其特征在于所述g步 骤是将离心后得到的上清液减压浓缩，回收乙醇，然后将浓缩液加热至90～98 ℃，保温10～15分钟后，再将浓缩液冷却至30℃以下或干燥得到蛤营养保健调 味品。