[发明专利]一种71型肠道病毒及其应用

说明书

本发明涉及一株肠道病毒71型(以下简称EV71)及其应用。具体而言，本发明涉 及一种通过蚀斑法分离的单克隆病毒株，其子代病毒表现为遗传稳定，可用于人用疫 苗生产(尤其是婴幼儿疫苗生产)。本发明的病毒株或由其生产的疫苗可用于预防由 EV71病毒引起的疾病(例如手足口病，尤其是儿童的手足口病)，且具有滴度稳定、 免疫原性强、免疫剂量小的特点。

背景技术

EV71属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员， 归属于人类肠道病毒A。该病毒的颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突 出，直径约24～30nm，核酸为单股正链RNA。EV71病毒的基因组RNA中仅有一个开放 阅读框(ORF)，编码含2194个氨基酸的多聚蛋白。如同其他肠道病毒属成员一样， EV71基因组编码分子量分别为34KD、30KD、26KD和7KD的多肽VP1、VP2、VP3、VP4。 这些多肽组成原聚体，然后再拼装成具有五聚体样结构的亚单位。60个亚单位通过各 自的结构域相互连接，最终形成病毒的外壳。VP1、VP2和VP3三个多肽暴露在病毒外 壳的表面，而VP4包埋在病毒外壳的内侧与病毒核心紧密连接，因而抗原决定簇基本 上位于VP1-VP3上。EV71病毒由于没有类脂膜，所以它对乙醚、脱氧胆酸盐、去污剂 以及弱酸有抵抗性。此外，该病毒还能抵抗70％乙醇和5％甲酚皂溶液等常见的消毒 剂，但是高温(56℃，30min)处理和紫外线照射可以很快将病毒灭活，它对各种氧化 剂如高锰酸钾、双氧水、漂白粉等也很敏感。

EV71病毒的衣壳蛋白中，VP1是该病毒主要的中和决定因子，它直接决定病毒的 抗原性。由于VP1基因具有与病毒血清型完全对应的遗传多样性，VP1基因序列不仅 可作为肠道病毒属内不同血清型分类的依据，并可作为小RNA病毒科内不同属的分类 参考。因此VP1基因成了EV71基因分型和遗传进化分析的最重要的对象。目前基于 VP1核苷酸序列的差异，可将EV71分为A、B、C等三个基因型，其中A型仅包括原型 株BrCr-CA-70；B型和C型又可进一步分为B1、B2、B3、B4以及C1、C2、C3和C4亚 型。

人是EV71病毒唯一的自然宿主，主要的传染源为病人、健康携带者和隐性感染者。 EV71的传染性强，传播途径复杂，流行强度大，传播快，在短时间内即可造成大流行。

EV71引起的疾病的流行一年四季均可出现，常见于夏秋季，且有周期流行特点(间 隔2～4年)。下面简单介绍一下EV71引起的疾病的流行历史。

国际流行历史

1974年，Schmidt等首次从美国加利福尼亚一例脑炎患儿的粪便标本中分离到 EV71，此后的几十年，EV71已经在世界范围内导致十几次规模不等的流行，尤其是最 近十年在亚太地区的流行呈现上升趋势。

1975年，保加利亚发生EV71大流行，共有705名患儿受到感染，其中545例为 无菌性脑膜炎，149例发生了急性松弛性瘫痪，68例出现延髓受损，死亡44例。低龄 儿童是本次流行的主要对象，93％的病例和83.8％的死亡病例发生在5岁以下人群。但 本次疫情未发现HFMD(手足口病)病例。

1978年，匈牙利发生EV71疫情，出现826例无菌性脑膜炎和724例脑炎病例， 其中332例经病毒培养或血清学检验证实为EV71感染。所述病例中有严重神经系统损 伤患者，包括13例脊髓灰质炎样麻痹、145例脑炎、161例脑膜炎，死亡45例。本次 疫情发现4例HFMD病例。

1972～1973年和1978年，日本出现两次EV71大流行，但病情表现相对温和，除 少数为脑炎、松弛性麻痹、无菌性脑膜炎外，主要为HFMD病例。其后，日本出现多起 EV71的流行。1982年发生爆发流行，共计14万余例病例。1997年，日本出现EV71 的局部流行。2000年日本再次出现EV71的流行。从1982年至2000年，只报道了零 星的死亡和重症病例。

1997年，马来西亚出现EV71疫情，共报告病例5999例，主要临床表现为HFMD， 39例出现急性脊髓灰质炎样麻痹或无菌性脑膜炎，死亡至少31例，死者平均年龄仅 1.5岁，病程仅2天。