[发明专利]干酪乳杆菌Zhang中GroEL的蛋白序列

说明书

【技术领域】

本发明属于基因工程领域，具体地，涉及一种蛋白编码序列，特别 是一种干酪乳杆菌Zhang中GroEL的蛋白序列。

【背景技术】

益生菌是指通过摄入适当量从而对宿主产生有益作用的活菌，乳杆 菌亦是这一大家族中的主要成员。它们不仅可以加工成各种食品通过消 化道发挥有益作用，还可以外用于同样存在固有菌群的泌尿系统和皮 肤。常见功能主要包括保持肠道正常菌群，对抗感染、缓解乳糖不耐症、 降低胆固醇、抑制癌症和刺激免疫系统。最近几年的临床研究热点集中 于炎症性胃肠病、过敏、外科感染、抗生素相关腹泻、妇科感染、粘膜 免疫、癌症以及肥胖等相关症状上。由于益生菌与健康、营养、饮食的 密切关系，越来越受到消费者的重视。包含有功能性益生菌的食品与饮 料消费正成为全球的一项消费趋势。虽然有着很好的功能性，但其应用 范围却受到很大限制，由于对热、湿度和其它苛刻的条件比较敏感。因 此，能否适应这些环境就成为筛选益生菌的首要条件之一。

GroEL热休克家族蛋白(又称为分子伴侣，属于Hsp60家族)，主要 功能是帮助新合成的蛋白质正确折叠和装配，以保证蛋白质有效地发挥 功能，在乳杆菌适应逆境过程中有着举足轻重的作用。从结构上来看， GroEL蛋白是同型寡聚复合物，由14个相对分子质量58×10³的亚基 组成，形成两层垛叠的背靠背双环组成的中空圆柱结构，每个环由7个 亚基组成。在GroEL的中央腔中可结合多种非天然的多肽，底物结合 主要靠非天然多肽暴露的疏水侧链和GroEL顶端结构域的疏水残基相 互作用。早期基因突变的研究证明，GroEL在任何温度下都是菌株细胞 生长所必需的。它的突变会降低RNA和DNA合成速度，在非正常温 度下细胞不能进行正常的分裂，和乳杆菌细胞的温度胁迫反应相关。新 近的研究结果却也表明，GroEL蛋白可能竞争抑制约氏乳杆菌对于 HT-29细胞的黏附，这也意味着该蛋白也分泌信号序列，有黏附功能和 黏附关联。

本发明参考其它菌株GroEL基因序列，克隆测序获得干酪乳杆菌 Zhang（Lactobacillus casei Zhang）GroEL基因序列，并对不同物种 GroEL基因核酸和氨基酸序列进行相似性比较，为今后开展与干酪乳杆 菌中GroEL蛋白的相关研究工作提供基础资料。

在文献“王俊国等，干酪乳杆菌Zhang对大鼠抗氧化能力的影响， 营养学报2009年第31卷第1期，公开日2009年2月中公开了干酪乳 杆菌Zhang菌株。

在中国专利申请CN200810175856.7，公开号CN101418270A，公开 日2009年4月29日，扉页、第2页、第6页中公开了干酪乳杆菌Zhang 菌株，并已经说明保藏号为CGMCC1697。

在专利申请号2006101273622，公开号CN 101144062A，公开公开 日为2008年3月19日，提供了分类命名为干酪乳杆菌，名称为zhang 的菌株的生物材料保藏证明，保藏号为CGMCC 1697。

上述文献内容引入本文作为参考。

【发明内容】

本发明提供了一种干酪乳杆菌Zhang中热休克蛋白GroEL编码序 列，该序列是干酪乳杆菌Zhang应激密切相关的基因，其核苷酸序列与 已公布的干酪乳杆菌BL23的核酸序列FM177140和干酪乳杆菌 ATCC334的核酸序列CP000423有99%的相似性。

具体地，本发明提供了一种干酪乳杆菌Zhang中的热休克蛋白 GroEL的编码序列，该序列的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，

本发明还提供了一种分离出的干酪乳杆菌Zhang中的GroEL蛋白， 该蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。

本发明还提供了SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守 性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。

本发明还提供了一种干酪乳杆菌Zhang中热休克蛋白GroEL基因 的克隆和测序方法。该方法包括步骤：（1）PCR引物设计与合成；（2） 干酪乳杆菌DNA的提取；（3）目的片断的PCR扩增；（4）琼脂糖凝胶 电泳检测；（5）目的基因片断回收与鉴定；（6）目的基因片断的克隆与 鉴定；（7）测序，其特征在于PCR引物为SEQ ID NO:3（正向）和SEQ ID NO:4（反向），其序列信息如下：