[发明专利]一种改良人工合成甘蓝型油菜用于杂种优势利用的方法有效

专利信息
申请号: 200910251074.1 申请日: 2009-12-29
公开(公告)号: CN101785425A 公开(公告)日: 2010-07-28
发明(设计)人: 钱伟;李加纳;马丁·弗奥;梅家勤;李勤菲;殷家明 申请(专利权)人: 西南大学
主分类号: A01H1/02 分类号: A01H1/02;A01H1/08;A01H4/00
代理公司: 重庆华科专利事务所 50123 代理人: 康海燕
地址: 400715*** 国省代码: 重庆;85
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摘要:
搜索关键词: 一种 改良 人工合成 甘蓝 油菜 用于 杂种优势 利用 方法
【权利要求书】:

1.一种改良人工合成甘蓝型油菜用于杂种优势利用的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)油用甘蓝的选育

通过甘蓝型油菜与甘蓝轮回亲本回交,将甘蓝型油菜优良油用农艺性状转育到甘蓝中,培育一种油用甘蓝材料,具体做法是:

以种子饼粕硫苷含量低于30μmol/g,种子中芥酸含量低于1 %的双低优质甘蓝型油菜作母本,甘蓝作父本,人工去雄授粉8-12天后,通过胚挽救方式获得种间杂种试管苗;然后将种间杂种试管苗移植到田间,开花期时,人工去雄并授以甘蓝的花粉,通过胚挽救方式获得BCF1,或者对种间杂种进行小孢子培养,获得双二倍体;对回交后代进行农艺性状和品质性状的选择,染色体数目和染色体行为分析,筛选出种子饼粕硫苷含量低于30 μmol/g,种子中芥酸含量低于1 %的油用甘蓝材料;

所述胚挽救方法的具体步骤是:

摘取授粉后8-12天的子房,用质量浓度为10 %的次氯酸钠表面消毒,接种到含有质量浓度为3 %蔗糖,1.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA激素的MS培养基中;放置到光照培养室中培育,16小时光照,8小时暗处理,20 ℃,接种约15天后,从胚珠中剥离膨大的胚到MS培养基中发芽;

(2)改良人工合成甘蓝型油菜选育

将步骤(1)的油用甘蓝与种子饼粕硫苷含量低于30μmol/g,种子中芥酸含量低于1 %的白菜型油菜杂交,其杂种通过胚挽救获得无性系试管苗,试管苗在移植田间前,采用质量浓度为0.05 %的秋水仙素泡根处理6到12小时,诱导染色体加倍,人工合成甘蓝型油菜,并筛选结实性好,花粉育性正常,非同源染色体配对频率低的人工合成甘蓝型油菜;

(3)强优势组合的筛选

将改良后的人工合成甘蓝型油菜与自然甘蓝型油菜杂交,配制杂交组合,通过多环境的产量比较田间试验,筛选强优势的组合。

2.根据权利要求1所述的改良人工合成甘蓝型油菜用于杂种优势利用的方法,其特征在于,所述步骤 (1)的小孢子培养方法具体步骤是:

摘取直径为2.5-3.5 mm大小的蕾16个, 用体积浓度为70 %的乙醇表面消毒半分钟,蒸馏水清洗2次,质量浓度为10%次氯酸钠浸泡15-20分钟,无菌水清洗3-5次,每次3-5分钟;将消毒好的花蕾用2 mL 的B5提取液研磨, 45 μm孔径的尼龙网过滤到10 mL离心管中,添加B5至5 mL,8000 rpm离心2分钟,吸去上清液,加入8 ml的B5提取液进行洗涤,离心2次后,吸去上清液,加入含质量浓度为0.01%秋水仙碱和质量浓度为16 %蔗糖的NLN培养液8 mL,并置于32 ℃的恒温箱中浅层无菌暗培养48小时,离心, 吸去上清液,加入16 mL含质量浓度为13 %蔗糖的NLN培养液混匀,分装到直径为60 mm的培养皿中,4蕾/皿,4 mL培养液/皿,置于25 ℃的恒温箱中暗培养,直至形成胚状体,转到含质量浓度为1.2 %琼脂糖的MS固体培养基中培养成苗。

3.根据权利要求1所述的改良人工合成甘蓝型油菜用于杂种优势利用的方法,其特征在于,步骤(2)的花粉育性观测方法具体步骤是:

取当天盛开,没有污染的花朵轻轻抖落在体积浓度为10 %的醋酸洋红溶液中染色1分钟左右,然后在光学显微镜下观察,小而染色浅的花粉粒为不正常花粉,大而染色深的为可育花粉粒,每个候选植株观察10朵花,每朵花观测10到20个视野,并计算可育花粉的比率。

 

4.根据权利要求1所述的改良人工合成甘蓝型油菜用于杂种优势利用的方法,其特征在于,多环境产量比较田间试验的具体步骤是:

以自然甘蓝型油菜和人工合成甘蓝型油菜为亲本,配置杂交组合,种植于不同的环境中,每个种植点设置重复和对照,生长期间,考察杂种的生长势和抗逆性,成熟时,考察其种子产量,在多环境中,表现高产的组合当选。

 

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