[发明专利]抗原检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种抗原检测试剂盒，其包括：

支持物；

固定在所述支持物上的捕获抗体，其中该捕获抗体能够特异结合抗原；

检测抗体-DNA缀合物(d-Ab-DNA缀合物)，其包括能够在不同于捕获抗体结合位点的抗原位点特异结合抗原的检测抗体(d-Ab)，和单链DNA寡核苷酸；

荧光物质-RNA-荧光猝灭物质缀合物，其包括互补于所述DNA寡核苷酸的单链RNA寡核苷酸，与该单链RNA寡核苷酸的一个末端结合的荧光物质，和与该单链RNA寡核苷酸的另一个末端结合的荧光猝灭物质；和

RNA酶H。

2.权利要求1所述的抗原检测试剂盒，其中所述抗原为选自以下的一种或多种：自身抗体、配体、天然提取物、肽、蛋白、金属离子、合成药物、天然药物、代谢物、基因组、病毒和病毒产物以及细菌和细菌产物。

3.权利要求2所述的抗原检测试剂盒，其中所述抗原为选自以下的两种或更多种：自身抗体、配体、天然提取物、肽、蛋白、金属离子、合成药物、天然药物、代谢物、基因组、病毒和病毒产物以及细菌和细菌产物，且试剂盒能够同时检测两种或更多种类型的抗原。

4.权利要求3所述的抗原检测试剂盒，其中检测抗体-DNA缀合物具有与所检测的抗原种类对应的彼此不同的DNA寡核苷酸，且DNA寡核苷酸彼此之间不互补。

5.权利要求1至4中任一项所述的抗原检测试剂盒，其中检测抗体和DNA寡核苷酸通过一种或多种选自酰胺键、二硫键、酯键、醚键和硫醚键的化学键结合。

6.权利要求5所述的抗原检测试剂盒，其中检测抗体和DNA寡核苷酸通过一种或多种选自SMPH(琥珀酰亚胺基-6-[β-马来酰亚胺基丙酰胺基]己酸酯)、SMPB(琥珀酰亚胺基-4-[p-马来酰亚胺基苯基]丁酸酯)、磺基-LC-SPDP(磺基琥珀酰亚胺基-6-(3’-[2-吡啶基二硫代]-丙酰胺基)己酸酯)和SIAB(N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯)的交联剂结合。

7.权利要求1至4中任意一项所述的抗原检测试剂盒，其中荧光物质为选自以下的一种或多种：香豆素类，呫吨类，花菁类，氟硼荧类，Alexa Fluor类以及DyLight Fluor类荧光物质。

8.权利要求1至4中任意一项所述的抗原检测试剂盒，其中荧光猝灭物质为选自以下的一种或多种：dabcyl类物质，QSY类物质，BHQ类物质以及FRET(荧光共振能量转移)。

9.一种抗原检测方法，包括如下步骤：

使样品接触能够特异结合待检测抗原的捕获抗体，以形成抗原-抗体结合；

使检测抗体-DNA寡核苷酸(d-Ab-DNA)缀合物接触结合至捕获抗体的抗原，其中检测抗体-DNA寡核苷酸缀合物包括能够在不同于捕获抗体结合位点的抗原位点特异结合抗原的检测抗体(d-Ab)，和结合至检测抗体的单链DNA寡核苷酸，以在抗原与d-Ab-DNA缀合物之间形成结合；

使荧光物质-RNA-荧光猝灭物质(F-RNA-Q)缀合物与既结合捕获抗体又结合d-Ab-DNA缀合物的抗原接触，其中F-RNA-Q缀合物包含互补于DNA寡核苷酸的单链RNA寡核苷酸、在RNA寡核苷酸的一个末端的荧光物质和在RNA寡核苷酸的另一个末端的荧光猝灭物质，以通过DNA-RNA的杂交形成DNA-RNA双链；

用降解DNA-RNA双链中RNA的RNA酶处理获得的DNA-RNA双链，以从RNA释放荧光物质，且产生荧光；以及

测量产生的荧光强度。

10.权利要求9所述的抗原检测方法，其中所述抗原为选自以下的一种或多种：自身抗体、配体、天然提取物、肽、蛋白、金属离子、合成药物、天然药物、代谢物、基因组、病毒和病毒产物以及细菌和细菌产物。

11.权利要求9所述的抗原检测方法，其中所述抗原为选自以下的两种或更多种：自身抗体、配体、天然提取物、肽、蛋白、金属离子、合成药物、天然药物、代谢物、基因组、病毒和病毒产物以及细菌和细菌产物，且所述方法能够用两种或更多种RNA寡核苷酸同时检测两种或更多种类型的抗原，其中每种RNA寡核苷酸相应于抗原的种类结合至不同的荧光物质。