[发明专利]一种制备环孢菌素A的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中分离纯化环孢菌素A的方法，其过程包含以下步骤：

(1)环孢菌素A的提取

向发酵液中加NaOH调PH值为中性，加入有机溶剂，搅拌提取5～8小时，将提取液滤出菌体收集滤液；

(2)大孔吸附树脂层析

大孔吸附树脂装柱，对树脂进行预处理，提取液上样，用洗涤剂处理上样后的树脂，然后洗脱液洗脱并收集洗脱液，加入石油醚萃取洗脱液，将萃取液浓缩待用；

(3)硅胶柱层析

硅胶装柱，将萃取浓缩液上样，用丙酮石油醚混合溶剂洗脱，收集纯度合格的环孢菌素A洗脱液；

(4)结晶纯化

洗脱液真空浓缩并结晶，用丙酮洗涤，最后真空干燥得无色粉末状环孢菌素A纯品。

2.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于发酵液与有机溶剂的体积比为1∶1～1∶2。

3.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于发酵液与有机溶剂的体积比为1∶1。

4.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于有机溶剂是甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或多种。

5.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于有机溶剂是丙酮。

6.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于发酵液提取温度为30℃～40℃。

7.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂为非极性的。

8.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂型号是D101、H103、HP20、HPD300、XDA-6或X-5。

9.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂型号是D101、HP20或X-5。

10.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂型号是D101。

11.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于预处理树脂所用的洗涤剂依次是纯水、3％氢氧化钠溶液和3％盐酸溶液。

12.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于上样后的树脂洗涤剂依次为3％盐酸和纯水。

13.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于洗脱剂为乙酸乙酯、甲醇和丙酮一种或多种。

14.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于洗脱剂为丙酮。

15.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析所选用的硅胶粒度为200-300目和100-200目中的一种或两种。

16.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析柱高径比为8∶1～12∶1。

17.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析柱高径比10∶1。

18.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于上样液为10％～30％柱体积。

19.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于上样液为20％柱体积。

20.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析中洗脱液配比为体积比丙酮∶石油醚＝20～40∶60～80。

21.根据权利要求1步骤(3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析中洗脱液配比为体积比丙酮∶石油醚＝30∶70。

22.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析洗脱液真空浓缩温度为60℃～75℃。

23.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于环孢菌素A的结晶温度为-5℃～20℃。

24.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于环孢菌素A的结晶温度为-10℃。

25.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于环孢菌素A的真空干燥温度为40℃～70℃。