[发明专利]一种用亲和素/链亲和素磁性复合微粒对生物分子进行免疫学检测的方法

权利要求书

1.一种用亲和素/链亲和素磁性复合微粒对生物分子进行免疫学检测的方 法，该方法用于非诊断目的，该方法包括以下步骤：

（1）抗体/抗原与亲和素/链亲和素磁性复合微粒的偶联

将生物素化的抗体/抗原与偶联缓冲液混合，加入亲和素/链亲和素磁 性复合微粒中，置于摇床，在4~37℃，100~300rpm条件下充分反应， 反应完后，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；用清洗缓冲液清 洗后，磁性分离，弃上清；

（2）封闭

加入封闭液，在4~37℃，100~300rpm条件下，于摇床中反应1~2小时， 封闭亲和素/链亲和素磁性复合微粒表面未与抗体或抗原结合的空白位 点；磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后，悬于保存缓冲液中备 用；

（3）与待测物结合

当待检标本为抗原时，将待检标本，酶标抗体/酶标抗原加入步骤（2 ）的产物中，在4~37℃，100~300rpm条件下，于摇床中反应15~30min ，使偶联在亲和素/链亲和素磁性复合微粒表面的生物素化的抗体与之 反应，双抗体夹心反应形成特异性生物素化抗体-抗原-酶标抗体的复 合物；竞争法反应形成生物素化抗体-抗原复合物和生物素化抗体-酶 标抗原复合物的混合物；用清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；

当待检标本为抗体时，将待检标本，酶标抗原/酶标抗体/酶标抗抗体 结合物加入步骤（2）的产物中，在4~37℃，100~300rpm条件下，于摇 床中反应15~30min，使偶联在亲和素/链亲和素磁性复合微粒表面的生 物素化的抗原与之反应结合，双抗原夹心反应形成特异性生物素化抗 原-抗体-酶标抗原复合物；竞争法反应形成生物素化抗原-抗体复合物 和生物素化抗原-酶标抗体复合物的混合物；间接法反应形成生物素化 抗原-抗体-酶标抗抗体复合物；用清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上 清；

（4）检测

向步骤（3）产物中加入显色底物显色或加入化学发光底物进行发光信 号检测；

上述步骤（2）封闭液是游离生物素与牛血清白蛋白、小牛血清、脱脂 奶粉、乙醇胺或山羊血清中的任一种或多种成分的混合物；所述封闭 液的质量体积浓度为1~10%；

上述步骤（2）清洗缓冲液是

pH=7.0~9.0,浓度为0.005M~1M的Tris-HCl缓冲液、

pH=5.0~8.0,浓度为0.5×~10×的PBS缓冲液、

pH=3.6~5.6,浓度为0.005M~1M的醋酸盐缓冲液、

pH=3.0~7.0,浓度为0.005M~1M的柠檬酸盐缓冲液、

pH=9.0~11,浓度为0.005M~1M的CBS缓冲液、

pH=7.0~9.0,浓度为0.005M~1M的TBS缓冲液中的任一种或者是含0.02~ 0.2%吐温的上述缓冲液；

上述步骤（2）保存缓冲液是

pH=7.0~9.0,浓度为0.005M~1M的Tris-HCl缓冲液、

pH=5.0~8.0,浓度为0.5×~10×的PBS缓冲液、

pH=3.6~5.6,浓度为0.005M~1M的醋酸盐缓冲液、

pH=7.0~9.0,浓度为0.005M~1M的TBS缓冲液、

pH=3.0~7.0,浓度为0.005M~1M的柠檬酸盐缓冲液、

pH=9.0~11,浓度为0.005M~1M的CBS缓冲液中的任意一种；

上述步骤（3）酶标抗体、酶标抗原、酶标抗抗体结合物是碱性磷酸酶 标记或辣根过氧化物酶标记的抗体、抗原、抗抗体结合物；清洗缓冲 液为0.005M~1M的Tris-HCl缓冲液或0.5×~10×的PBS缓冲液。