[发明专利]肺炎型支原体药敏快速检测试剂及制备方法

权利要求书

1.一种肺炎型支原体药敏快速检测试剂，包括肺炎支原体培养基和药敏板，其特征在于，所述肺炎支原体培养基按质量百分比包括下述组分：

基础培养基70～90％；

小牛血清10～30％；

酵母粉0.5～2.5％；

葡萄糖0.1～0.5％；

上述肺炎支原体培养基中还包括外加0.08～0.2ppm的酚红、10～20万单位/100ml的青霉素；

以上各组分的质量百分比之和为100%；

上述肺炎支原体培养基中，基础培养基按质量百分比包括下述组分：

母液        96～99％

氯化钠      0.3～0.7％

磷酸二氢钾  0.1～0.3％

蛋白胨      0.3～3％

以上各组分的质量百分比之和为100%；

其中母液为牛肉浸出液与猪胃或肺消化液按质量比4∶6～6∶4的混合的混合溶液；

所述药敏板是一块24孔培养板，标有1～12号，每号标有A、B两孔，其中1～11号孔分别包被有11种常规治疗支原体药物，这些药物从以下7大类药物中筛选出：β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类；每个号的A、B两孔分别包被同一种药的低、高两种不同浓度的药液，高浓度药液均为一次成人药量溶解到1～5ml缓冲液中，低浓度药液为高浓度药液再稀释15～25倍，第12孔不包被药物，留作对照；其中所述1～11号孔分别包被以下11种药物且对应的A、B两孔低、高浓度药液的浓度如下表所示：

药物名称       低浓度药液(mg/ml)    高浓度药液(mg/ml)

盐酸多西环素   0.6～1.0             9.0～12.0 

四环素           1.6～2.0    16.0～30.0

克拉霉素         0.4～0.8    6.25～14.0

交沙霉素         0.3～0.6    4.0～8.0

盐酸米诺环素     0.3～0.6    4.0～8.0

阿奇霉素         1.4～1.8    14.0～28.0

司帕沙星         0.8～1.2    9.0～17.0

红霉素           1.4～1.8    16.0～28.0

盐酸洛美沙星     1.0～3.0    17.0～35.0

氯氟沙星         1.0～3.0    17.0～35.0

盐酸左氧氟沙星   0.8～1.4    12.0～20.0。

2.一种权利要求1所述肺炎型支原体药敏快速检测试剂的制备方法，包括下述步骤：

一、肺炎支原体培养基的制备

(1)分别提取新鲜牛肉浸出液、猪胃或肺消化液，按质量比4∶6～6∶4的比例，将牛肉浸出液与猪胃或肺消化液的混合制得培养基母液；

(2)将以上培养基母液与下列物质按质量百分比搅拌混合：

母液         96～99％

氯化钠       0.3～0.7％

磷酸二氢钾   0.1～0.3％

蛋白胨       0.3～3％

以上各组分的质量百分比之和为100%；

待氯化钠、磷酸二氢钾和蛋白胨完全溶解后，煮沸过滤，取滤液，即制得基础培养液；

(3)将基础培养基与下列物质按质量百分比搅拌混合均匀，

基础培养基  70～90％

小牛血清    10～30％

酵母粉      0.5～2.5％

葡萄糖      0.1～0.5％

外加：酚红0.08～0.2ppm，青霉素10～20万单位/100ml，调节pH值为 6.0～8.0，即制得肺炎支原体培养基；

以上各组分的质量百分比之和为100%；

二、药敏板的制备

(1)将24孔培养板每两孔标一个孔号，孔号从1标至12，每号的两孔分别记为A、B孔，经粗洗、精洗、40℃恒温烤干备用；

(2)从以下7大类药物：β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、林可霉素类、吕霉素类、喹诺酮类中筛选出11种常规治疗支原体药物；

(3)每种药按成人每次药量溶解到1～5ml缓冲液中，待药完全溶解后，离心提取上清，再配成两种浓度：高浓度药液为一次成人药量1～5ml，低浓度药液为高浓度药液再稀释15～25倍；

(4)用加样器分别吸取各药物的低、高浓度药液，分加到药敏板1-11号各自的A、B两孔内，静置30分钟后，吸出弃去；

其中所述1～11号孔分别包被以下11种药物且对应的A、B两孔低、高浓度药液的浓度如下表所示：

药物名称   低浓度药液(mg/ml)    高浓度药液(mg/ml)

盐酸多西环素     0.6～1.0    9.0～12.0

四环素           1.6～2.0    16.0～30.0

克拉霉素         0.4～0.8    6.25～14.0

交沙霉素         0.3～0.6    4.0～8.0

盐酸米诺环素     0.3～0.6    4.0～8.0

阿奇霉素         1.4～1.8    14.0～28.0

司帕沙星         0.8～1.2    9.0～17.0

红霉素           1.4～1.8    16.0～28.0

盐酸洛美沙星     1.0～3.0    17.0～35.0

氯氟沙星         1.0～3.0    17.0～35.0

盐酸左氧氟沙星   0.8～1.4    12.0～20.0。