[发明专利]鱼用浸泡疫苗多组合佐剂及其应用和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及海洋生物疾病免疫防治技术，具体是鱼用浸泡疫苗免疫多组合佐剂及其应用和使用方 法。

背景技术

我国养殖鱼类产量据世界首位，但鱼类的疾病防治技术研发速度较慢，开发的渔用疾病防治产品不 能满足生产的需求，特别在渔用疫苗开发与应用方面，目前可供渔业生产上选择使用的产品不多。因此 养殖中鱼类细菌性疾病治疗过多依靠投喂抗生素，其结果是长期的应用抗生素不仅会降低水产品的质量， 还会导致细菌的耐药性增强，给以后的疾病控制增加难度。国外在鱼类疾病控制方面已普遍采用疫苗免 疫的方法，包括注射用疫苗、浸泡用疫苗及口服疫苗等。国内的鱼用疫苗产品制剂种类不多，在鱼类疫 苗研究方面多侧重于注射用疫苗。鱼类注射用疫苗对疾病预防效果明显，但注射免疫工作量大、工作效 率低，且会对鱼体造成伤害。而鱼类浸泡用疫苗不存在上述缺点，但单纯的使用疫苗浸泡效果不佳。

目前，有关鱼类浸泡免疫用疫苗产品因受浸泡免疫效果较差的限制，开发的产品不多。国内已开发 的鱼类浸泡疫苗佐剂有莨菪碱、葡聚糖、IMS1312，试验证实，使用后免疫保护率均不理想。而国外的 鱼类浸泡免疫佐剂多为保密配方。基于以上现状，我国的鱼类浸泡疫苗研发速度处于缓慢发展状态，限 制阻碍了产业的发展。因此提供鱼类浸泡疫苗佐剂，提高鱼类浸泡疫苗效果，对推动水产养殖用疫苗制 剂产业的快速发展是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是为鱼类浸泡用疫苗提供一种高效的多组合免疫佐剂。

鱼类选用浸泡疫苗免疫，不仅操作方便节省时间，而且相对于注射免疫对鱼的损伤小，因此鱼类选 用浸泡疫苗免疫是一种最佳的免疫方案。但选用浸泡疫苗免疫时，在通常不加浸泡度苗佐剂或特异免疫 增强剂的情况下，鱼体仅仅通过鳃部接触疫苗抗原，身体表面其他的可以激发免疫反应的部位多被体表 的粘液所覆盖，导致可呈递疫苗抗原的细胞不能有效接触到疫苗抗原，因此使用能够去除鱼体粘液的佐 剂成分，可以提高鱼类浸泡疫苗免疫的效果。研究经过试验研究发现，N-乙酰半胱氨酸(简称NAC)、 曲拉通X-100(即TRITON X-100)具有溶解鱼体表粘液的能力，皂角苷具有提高鱼类粘液免疫力与细胞 免疫的功效，而消旋山莨菪碱(又称654-2)可使鱼体肌肉松弛，易于疫苗抗原向体内的渗入。四种佐剂 通过组合既解决了鱼体粘液阻止疫苗抗原接触鱼体抗原呈递细胞的问题，又通过皂角苷提高了鱼体粘液 免疫与细胞免疫力，同时654-2使鱼体肌肉松弛，加强了抗原渗透鱼体的效果。该四种佐剂组合有效提 高了鱼类浸泡度苗免疫效果，使用证实具备佐剂的功能，且安全试验证实在使用浓度范围内对鱼类及环 境安全。因此确定NAC、TRITON X-100、皂角苷、654-2佐剂组合为高效鱼用浸泡疫苗免疫多组合佐剂。

因此，本发明鱼用浸泡疫苗多组合佐剂包括NAC、TRITON X-100、皂角苷和654-2，其中NAC、 TRITON X-100、皂角苷和654-2的使用浓度范围分别为0.1-10mg/L、0.1-10mg/L、0.1-50mg/L、1-60 mg/L。

本发明的浓度分别在0.1-10mg/L、0.1-10mg/L、0.1-50mg/L、1-60mg/L的NAC、TRITON X-100、 皂角苷和654-2免疫多组合佐剂，应用于包括海水和淡水鱼类的浸泡疫苗中协同作用达到高效免疫效果。

本发明的使用方法如下：

(1)首先选用体表完好健康的待免疫鱼类，体重应在每尾2g以上；

(2)将待免疫的鱼移入浓度范围均为0.1-10mg/l的NAC、TRITON X-100混合养殖用水溶液中， 预浸泡1-20min，之后加入浓度0.1-50mg/L的皂角苷及待用疫苗，浸泡1-20min，再向疫苗浸泡液 中加入浓度1-60mg/L的654-2待1-10min即完成免疫。

本发明的积极效果在于：用NAC、TRITON X-100、皂角苷、654-2多组合制剂作为疫苗组合佐剂 后可以显著提高疫苗的免疫效果，效果显著好于单一佐剂；使用方法简便，成本较低，使用安全，对鱼 的存活率与生长速度没有影响，而且不需要额外的设施与工序，对环境及操作人员同样无害。

具体实施方式