[发明专利]鱼用浸泡疫苗组合佐剂及其应用和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及海洋生物疾病免疫防治技术，具体是鱼用浸泡疫苗组合佐剂及其应用和使用方法。

背景技术

我国养殖鱼类产量据世界首位，但鱼类的疾病防治技术研发速度较慢，开发的渔用疾病防治产品不 能满足生产的需求，特别在渔用疫苗开发与应用方面，目前可供渔业生产上选择使用的产品不多。因此 养殖中鱼类细菌性疾病治疗过多依靠投喂抗生素，其结果是长期的应用抗生素不仅会降低水产品的质量， 还会导致细菌的耐药性增强，给以后的疾病控制增加难度。国外在鱼类疾病控制方面已普遍采用疫苗免 疫的方法，包括注射用疫苗、浸泡用疫苗及口服疫苗等。国内的鱼用疫苗产品制剂种类不多，在鱼类疫 苗研究方面多侧重于注射用疫苗。鱼类注射用疫苗对疾病预防效果明显，但注射免疫工作量大、工作效 率低，且会对鱼体造成伤害。而鱼类浸泡用疫苗不存在上述缺点，但单纯的使用疫苗浸泡效果不佳。 目前，有关鱼类浸泡免疫用疫苗产品因受浸泡免疫效果较差的限制，开发的产品不多。国内已开发的鱼 类浸泡疫苗佐剂有莨菪碱、葡聚糖、IMS1312，试验证实，使用后免疫保护率均不理想。而国外的鱼类浸 泡免疫佐剂多为保密配方。基于以上现状，我国的鱼类浸泡疫苗研发速度处于缓慢发展状态，限制阻碍 了产业的发展。因此提供鱼类浸泡疫苗佐剂，提高鱼类浸泡疫苗效果，对推动水产养殖用疫苗制剂产业 的快速发展是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是为鱼类浸泡用疫苗提供一种高效的免疫组合佐剂。

鱼类选用浸泡疫苗免疫，不仅操作方便节省时间，而且相对于注射免疫对鱼的损伤小，因此鱼类选 用浸泡疫苗免疫是一种最佳的免疫方案。但选用浸泡疫苗免疫时，在通常不加浸泡疫苗佐剂或特异免疫 增强剂的情况下，鱼体仅仅通过鳃部接触疫苗抗原，身体表面其他的可以激发免疫反应的部位多被体表 的粘液所覆盖，导致可呈递疫苗抗原的细胞不能有效接触到疫苗抗原，因此使用能够去除鱼体粘液的佐 剂成分，可以提高鱼类浸泡疫苗免疫的效果。研究经过试验研究发现二硫苏糖醇(简称DTT)，能温和溶 解鱼体表粘液，VD3可以提高鱼类粘液免疫力，而消旋山莨菪碱(又称654-2)可使鱼体肌肉松弛，易于 疫苗抗原向体内的渗入。三种佐剂通过组合使用能够有效提高鱼类浸泡疫苗免疫效果，具备佐剂的功能， 且安全试验证实在使用浓度范围内对鱼类及环境安全。因此确定DTT、VD3和645-2作为鱼类浸泡疫苗免 疫组合佐剂。

因此，本发明鱼用浸泡疫苗组合佐剂其特征在于：作为鱼类浸泡疫苗的组合佐剂包括DTT、VD3和 645-2，其使用浓度范围分别为1-50mg/L、0.1-20mg/L和1-60mg/L。

本发明的使用方法：首先选用体表完好健康的待免疫鱼类，体重应在每尾2g以上：

将待免疫的鱼移入浓度范围为1-50mg/L DTT预处理液中，浸泡时间1-20min后，向其中加入浓度 范围为0.1-20mg/L的VD3与待用疫苗，待2-20min之后再向其中加入浓度范围为1-60mg/L的645-2， 待5-20min即完成免疫。

将浓度分别在1-50mg/L、0.1-20mg/L和1-60mg/L的DTT、VD3和645-2免疫组合佐剂，应用于包 括海水和淡水鱼类的浸泡疫苗中协同作用达到高效的免疫效果。

本发明的积极效果在于：用DTT、VD3、654-2组合制剂作为疫苗组合佐剂后显著提高疫苗的免疫 效果，效果显著好于单一佐剂；使用方法简便，成本较低，使用安全，对鱼的存活率与生长速度没有影 响，而且不需要额外的设施与工序，对环境及操作人员同样无害。

具体实施方式

本发明鱼用浸泡疫苗组合佐剂其特征在于：作为鱼类浸泡疫苗的组合佐剂包括DTT、VD3和645-2， 其中DTT、VD3和645-2的使用浓度范围分别为1-50mg/L、0.1-20mg/L和1-60mg/L。

考虑到免疫效果，上述DTT和645-2的纯度优于或相当于化学纯级。

本发明的使用方法如下：

(1)首先选用体表完好健康的待免疫鱼类，体重应在每尾2g以上；