[发明专利]一株坚强芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129。

2.权利要求1所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129的分离与纯化方法：

(1)土样采集：从山东省林业科学研究院实验苗圃土壤表层到15cm处取样200g，混合过粗筛，取25g作分离用；

(2)培养基平板制备：将NA培养基和PDA培养基融化，分别倒入灭菌培养皿，冷却，制成NA和PDA平板，所述NA培养基配方为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂14g，蒸馏水1000mL，pH7.3；所述PDA培养基配方为去皮切块的马铃薯200g，葡萄糖17g，琼脂12-14g，蒸馏水1000mL；

(3)称取1g土样于250ml灭菌三角瓶中，加100mL无菌水，振荡，制成10^-2土壤悬浮液，静置5min，按10倍梯度稀释到10^-7；

(4)取上述稀释后的土壤悬浮液1mL，加到培养基NA或PDA平板上，用弯玻棒涂匀，置于培养箱26℃恒温，培养5-7天。

3.权利要求1所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129的发酵方法：

1)坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129菌种活化：将斜面上保存的菌种接种到NA试管斜面上面，于28℃培养24h，所述NA培养基配方为蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂14g，蒸馏水1000mL，pH7.3；

2)坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129种子液的制备：从斜面上挑三环菌接种到装有NB培养液的三角瓶中，置于恒温振荡培养箱中，振荡培养，28℃，200r/min培养8h即可获得种子液，所述的NB培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.3；

3)坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129发酵液的制备：以培养液初始pH7.2，初始接种量2％，装液量50mL/500mL，将种子液接入到装有NYBD发酵培养液的500mL三角瓶中，置于恒温振荡培养箱中，振荡培养，28℃，200r/min培养48h，所述的NYBD培养基配方为：牛肉浸膏8g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，氯化钠5g，水1000mL，pH 7.3；

4)坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129发酵培养：将摇床发酵的菌液接种到装有100mL培养基的200mL种子发酵罐，初始pH7.2，温度32℃，通风体积比1∶0.8，从菌种接种后12h菌体生长处于指数生长中期，转入2000L的发酵罐，以70％的罐装量，pH7.3，温度为28-34℃，前期通风体积比为1∶0.8，后期通风体积比为1∶1发酵，所述大量发酵培养配方为：豆粉1.8％，玉米粉1.6％，淀粉0.44％，碳酸钙0.44％，鱼粉0.47％，硫酸镁0.01％，磷酸二氢钾0.03％，其余为水，pH 7.3，所述的百分数为重量百分数。

4.坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129在防治作物的核桃炭疽病、黄瓜灰霉病、小麦纹枯病、苹果轮纹病、烟草赤星病、玉米小斑病、冬枣黑斑病、棉花枯萎病、棉花红腐病和小麦赤霉病方面的应用。

5.如权利要求4所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129在防治黄瓜灰霉病的防治方面的应用。

6.坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129在黄瓜促生增产方面的应用。

7.坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129在防治黄瓜、土豆根线虫方面的应用。

8.坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129在防止黄条跳甲方面的应用。

9.坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)Bf-02CGMCC No.3129在杀灭臭椿皮蛾和乔蝽巢蛾方面的应用。