[发明专利]增强免疫反应的人半乳凝素-9缺失体的制备及应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种蛋白制备方法以及应用。具体而言，该蛋白是一种 人半乳凝素-9的缺失体，由人半乳凝素-9的C端的129个氨基酸序列 所组成，通过钓取人半乳凝素-9的C端基因，构建其原核表达系统，分 离纯化而制备。所述蛋白具备促进DC细胞及巨噬细胞活化功能，表现为 增强细胞免疫反应，而缺失了人半乳凝素-9全蛋白的免疫抑制作用。所 述蛋白可以应用于抗病毒、抗感染药品的生产中。

背景技术：

半乳凝素(galectin)存在于各种生物体内，不仅分布于细胞核，也 分布于细胞质乃至细胞外基质。人半乳凝素-9(Gal-9)作为家族成员 之一，除了能诱导嗜酸粒细胞聚集和活化外，还介导细胞分化、凋亡、 黏附、细胞间聚集、炎症反应的调控和肿瘤转移等。编码Gal-9的基因 于人类染色体定位在17ql 1.1，包含11个外显子，转录本长度约为1.7kb。 其编码蛋白大约为36kDa，包含两个同源的糖识别结构域(cabohydrate recognition domain，CRD)，两者由一条肽链将其相连[Lipkowitz MS， Leal-Pinto E，Cohen BE，et al.galectin 9 is the sugar-regulated urate transporter/channel UAT[J].Glycoconj J，2004，19(7-9)： 491-498.]。Gal-9在组织中分布广泛，已在人的肝脏、小肠、胸腺、 肾脏、脾脏、肺脏、心肌和骨骼肌等组织内发现。

通过结合表达于不同细胞表面的Tim-3分子，Gal-9蛋白分别发挥促 进非特异性免疫反应及下调特异性免疫应答的双向调节作用。具体的作 用机制包括Gal-9分子一方面在免疫反应初始阶段通过促进DC等炎症细 胞的活化增强免疫反应、而另一方面在免疫反应效应阶段通过抑制Th1 细胞活性而双向调节体内的免疫反应[Nobumoto A，Galectin-9expands unique macrophages exhibiting plasmacytoid dendritic cell-like phenotypes that activate NK cells in tumor-bearing mice.Clin Immunol.；130(3)：322-30.Anderson  AC，Promotion of tissue inflammation by the immune receptor Tim-3 expressed on innate immune cells.Science.2007；318(5853)：1141-3.]。Gal-9通过表达于 DC、巨噬细胞等炎症细胞以及活化的T细胞表面的Tim-3分子发挥作用。 在自身免疫病中，Gal-9/Tim-3分子可以通过抑制T细胞的活性而缓解疾 病的进程[Chou FC.Attenuation of Th1 response through galectin-9 and T-cell Ig mucin 3 interaction inhibits autoimmune diabetes in NOD mice.Eur J Immunol.2009.]，但在用外源Gal-9干预的过程中 也存在激活体内炎症细胞的潜在危害；另一方面，Gal-9/Tim-3相互作用 可以通过增强DC细胞活性促进抗病毒及抗肿瘤免疫，但Gal-9/Tim-3对 T细胞的抑制则可能促进肿瘤或病毒的免疫逃避[Sharvan Sehrawat. Role of Tim-3/Galectin-9 Inhibitory Interaction in Viral-Induced Immunopathology：Shifting the Balance toward Regulators.The Journal of Immunology，2009，182：3191.Jihe ne Klibi.Blood diffusion and Th1-suppressive effects of galectin-9-containing exosomes released by Epstein-Barr virus-infected nasopharyngeal carcinoma cells.Blood.2009；113：1957.Keiko Nagahara，Galectin-9 Increases Tim-3+Dendritic Cells and CD8+T Cells and Enhances Antitumor Immunity via Galectin-9-Tim-3 Interactions.The Journal of Immunology，2008，181：7660.]。Gal-9分子的双向调节作用为该分 子的应用带来不便。