[发明专利]超临界萃取蟾皮的方法、由此得到的产品和应用

说明书

技术领域

本发明涉及用超临界流体萃取蟾皮的方法以及由此得到的产品。另外，本发明还涉及包含上述蟾皮萃取物的药物组合物、制剂以及它们的应用。

背景技术

早在二十世纪80年代，人们就已开始研究蟾皮的化学成分和药理作用。蟾皮的水萃取物主要含有吲哚生物碱类，包括蟾蜍色胺(bufotenine)、蟾毒色胺内盐(bufotenidine)、去羟基蟾毒色胺(dehydrobufotenine)等；以及其他生物碱、喋啶类。另外，蟾皮水萃取物还包含少量的脂溶性甾族强心甙元，包括蟾蜍灵(bufalin)、脂蟾蜍配基(resibufogenin)、华蟾蜍素(cinobufagin)、海蟾蜍毒素(marinobufagin)、蟾蜍他灵(bufotalin)等。已有文献表明蟾酥抗肿瘤作用主要是其脂溶性部分的蟾毒配基类物质，即蟾毒内酯，如蟾蜍灵、华蟾蜍素。

已发现蟾皮中的强心甙元类物质如蟾蜍灵、脂蟾蜍配基和华蟾蜍素等可通过对Na⁺/K⁺-ATP酶、拓扑异构酶II、PKC同功酶活性以及ERK信号通路等的影响，促进细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的增殖(Weidemann H.，Na⁺/K⁺-ATPase，endogenous digitalis like compounds and cancer development-a hypothesis.Front Biosci，2005，1(10)：2165-76；Hashimoto S，Jing Y，KawazoeN et al.， Bufalin reduces the level of topoisomerase II in human leukemia cellsand affects and cytotoxicity of

由于蟾皮水萃取物中脂溶性物质的含量非常小，其抗肿瘤效果一般。目前采取有机溶剂如乙酸乙酯来萃取蟾皮的方法，虽然脂溶性物质的含量较高，但存在溶剂残留量高、不易与活性成分分离等缺陷。因此，仍需要开发出一种能够克服现有技术中的缺陷，提高萃取物中脂溶性成分含量并能实际工业应用的蟾皮萃取方法。

发明内容

根据本发明的一个方面，其提供一种用超临界流体萃取蟾皮的方法，其中在15-40MPa的压力、30-60℃的温度和15-40L/h的流速下用超临界流体对粒度为10-100目的蟾皮粉末进行萃取。

根据另一个方面，本发明提供根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物、以及包含该蟾皮萃取物以及药物学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。

根据再一个方面，本发明提供根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。

根据另一个方面，本发明提供在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向需要此等治疗的患者给药治疗有效量的根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物。

具体实施方案

超临界流体萃取分离过程是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。当处于超临界状态时，气体成为性质介于液体和气体之间的单一相态，具有和液体相近的密度，粘度虽高于气体但明显低于液体，但扩散系数为液体的10～100倍，因此对物料有较好的渗透性和较强的溶解能力，能够将物料中某些成分提取出来。

在根据本申请的方法中，可用作超临界流体的气体很多，包括但不限于二氧化碳、乙烯、二氯二氟甲烷、甲苯、丙烷和丙烯等。根据本发明的一个实施方案，使用二氧化碳作为超临界萃取剂，主要是因为二氧化碳无毒、无害、不易燃易爆、粘度低、表面张力低、沸点低、不易造成环境污染，而且方法流程简单、操作方便、节省劳动力和大量有机溶剂，减小了产生废水和废气污染的可能性。

在根据本发明的方法中，待进行超临界萃取的原料是通过粉碎干燥的蟾蜍全皮而得到的蟾皮粉末。原料颗粒度的大小决定了超临界流体与被萃取物接触面积大小。通常而言，颗粒度越小，接触的面积越大，萃取效果越好。反之，则萃取率低。在根据本发明的方法中，所用蟾皮粉末的粒度为10-100目(约1900-150微米)，优选为20-60目(约840-250微米)，更优选为20-30目(约840-590微米)。