[发明专利]一种从鸡蛋中同时提取甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺同时提取、净化及浓缩的方法。

背景技术

在对食品残留物进行检测时，如果能同时对多种物质进行检测，那么将大大提高工作效率，但只有同时能将多种残留物同时从样本中提取出来，才可能建立起高效的检测方法。氟苯尼考微溶于水，溶于有机溶剂。代谢物氟苯尼考胺极性强，易溶于水，国内外关于甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的提取方法有许多报道。提取剂一般为乙酸乙酯、乙腈、丙酮等。国内外对鸡蛋中该三种药物同时提取的方法未见报道。

发明内容

为了解决现有技术不能同时从鸡蛋中提取甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺的问题，本发明提供了一种同时提取、净化及浓缩方法，该方法简单、方便、快速，回收率高。

本发明所采用的技术方案是：一种同时从鸡蛋中提取甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺的方法，是将鸡蛋制成匀浆后，加入30％-50％乙腈溶液中混匀，再用体积比49∶49∶2的乙酸乙酯-乙腈-氨水提取。

所说的乙酸乙酯-乙腈-氨水提取是用乙酸乙酯-乙腈-氨水振荡萃取，离心，将上清液移出，重复萃取3-4次，合并上清液，即得提取液。

上述所说的提取液在氮吹仪上吹干，用乙腈溶解残渣，用经纯乙腈饱和的正己烷重复脱脂两次，然后氮吹仪上再次吹干，用30％-35％乙腈溶液溶解残渣，离心，过滤，得滤液，即浓缩液。

采用本发明方法能将鸡蛋中的甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺同时提取出来，并经净化、浓缩步骤得到的浓缩液可以供HPLC检测用。

本发明比较了不同的提取剂对回收率的影响，结果表明乙腈、丙酮提取效率较差，回收率较低，均小于40％，乙酸乙酯提取效率虽高，但提取的组织内源性物质较多，同时又不能有效提取氟苯尼考代谢物氟苯尼考胺，因为氟苯尼考胺只有在碱性条件下才能溶于有机溶剂，所以本实验采用乙酸乙酯-乙腈-氨水(49∶49∶2)作为提取剂，三种药物的提取效率都很高，均达到86％以上，碱性的乙酸乙酯-乙腈可有效提取氟苯尼考胺，且不影响其他两种药物的提取；乙腈可有效去除部分蛋白质，减少内源性杂质，有利于样品净化。

筛选出鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和代谢物氟苯尼考胺残留的最佳前处理方法。该方法简单、方便、快速，回收率高，平均回收率均在86％以上，日内和日间RSD均分别低于5.7％和9.8％，符合AOAC残留测定要求。

具体实施方式

本发明中所涉及的试剂的百分浓度，除特别说明外均指质量百分浓度。

1.实验鸡的饲养、给药和样品采集

1.1实验鸡选择及分组

选取28周龄京海黄鸡175只，体重1.75±0.20kg，随机分成7组，每组25只，单笼饲养。A、B、C组为甲砜霉素试验组，D、E、F组为氟苯尼考试验组，G组为空白对照组。给药前分别称重、编号。试验前预饲1周，饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料，自由饮水。

1.2给药剂量、途径及样品采集

各试验组产蛋鸡投药剂量如表1所示。给药前先将甲砜霉素和氟苯尼考灌注于空心胶囊中，然后分别直接投入到鸡的嗉囊中。试验组每天给药一次，给药时间均在上午8:00-9:00，连续5d，自给药日起至停药后15d内收集每天的鸡蛋。

表1给药方案

2(1)本发明提取、净化与浓缩步骤：

①用匀浆机将鸡蛋制成匀浆；

②准确称取2.0-3.0g鸡蛋匀浆样品，放于30-50mL具塞离心管中；

③加入1-1.5mL 30％-50％乙腈溶液置漩涡混合器上混匀；

④加入4-6mL乙酸乙酯-乙腈-氨水(49∶49∶2，V/V)，旋涡振荡混匀1-2min，再用超声波振荡萃取15min；

⑤6000-8000r/min离心10-15min，上清液转移至20-25mL玻璃管中；

⑥重复提取3-4次，合并上清液；

⑦在35-55℃水浴中，用氮气吹干；

⑧加入1.0mL-1.5mL乙腈溶解，涡旋振荡混匀1-2min；

⑨加3.0-5.0mL饱和正己烷(用纯乙腈饱和)脱脂，弃去上层正己烷，重复脱脂2次；

⑩在35-55℃水浴中，用氮气吹干；冷冻保存；

上机前用1.0mL 30％-35％乙腈溶解，转移至1.5mL离心管中；

12000-13400r/min离心15分钟，上清液经0.22μm滤膜过滤，滤液供HPLC测定。

(2)乙腈提取、净化与浓缩步骤：