[发明专利]无血清培养BHK21细胞的方法和制备疫苗的方法

权利要求书

1.一种无血清培养BHK21细胞的方法，该方法包括将BHK21细胞接种到细胞培养基中培养，其特征在于，所述细胞培养基包括基本培养基，并且以所述培养基溶剂的体积为基准，所述培养基还包括100-200g/100L的大豆蛋白、100-200g/100L的豌豆蛋白、100-200g/100L的蚕豆蛋白、0-100g/100L的马铃薯蛋白、0-200g/100L的小麦麸蛋白和50-100g/100L的水稻蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，以所述培养基溶剂的体积为基准，所述培养基包括150-180g/100L的大豆蛋白、150-180g/100L的豌豆蛋白、150-180g/100L的蚕豆蛋白、50-80g/100L的马铃薯蛋白、150-180g/100L的小麦麸蛋白和50-80g/100L的水稻蛋白。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，以所述培养基溶剂的体积为基准，所述培养基包括170-180g/100L的大豆蛋白、170-180g/100L的豌豆蛋白、170-180g/100L的蚕豆蛋白、50-60g/100L的马铃薯蛋白、150-160g/100L的小麦麸蛋白、50-60g/100L的水稻蛋白。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的无血清动物细胞培养基干粉，其中，所述大豆蛋白、豌豆蛋白、蚕豆蛋白、马铃薯蛋白、小麦麸蛋白和水稻蛋白通过以下方法制备：

a)粉碎大豆、豌豆、蚕豆、马铃薯、小麦麸或水稻植物原料至直径为0.1-3mm³的颗粒；

b)在酶解时间为0.5-10h、酶解PH值为5-9、酶解温度为45℃-60℃、酶量为2-5重量％的条件下酶解步骤a)所得的颗粒；其中，所述酶选自胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或几种，所述酶的酶活≥1×10⁵单位/克；

c)在80-100℃保持5-20min以终止步骤b)所述的酶解；

d)将步骤c)所得的酶解产物在3000-8000rpm下离心5-20min，收集上清液；

e)将步骤d)所得上清液用中空纤维过滤器超滤，所述过滤器所用膜的透过分子量为10000-20000道尔顿；

f)收集步骤e)所得超滤液，真空冷冻干燥，获得相应植物蛋白。

5.根据权利要求4所述的无血清动物细胞培养基干粉，其中，所述大豆蛋白、豌豆蛋白、蚕豆蛋白、马铃薯蛋白、小麦麸蛋白和水稻蛋白通过以下方法制备：

a)粉碎大豆、豌豆、蚕豆、马铃薯、小麦麸或水稻植物原料至直径为0.1-1mm³的颗粒；

b)在酶解时间为2-10h、酶解PH值为5-8、酶解温度为45℃-60℃、酶量为2-5重量％的条件下酶解步骤a)所得的颗粒；其中，所述酶选自胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或几种，所述酶的酶活≥1×10⁵单位/克；

c)在80-90℃保持5-10min以终止步骤b)所述的酶解；

d)将步骤c)所得的酶解产物在3000-5000rpm下离心15-20min，收集上清液；

e)将步骤d)所得上清液用中空纤维过滤器超滤，所述过滤器所用膜的透过分子量为10000-20000道尔顿；

f)收集步骤e)所得超滤液，真空冷冻干燥，获得相应植物蛋白。

6.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述基本培养基选自BME细胞培养基、DMEM细胞培养基、DMEM/F12细胞培养基、Fischer′s细胞培养基、IMDM细胞培养基、199细胞培养基、MEM细胞培养基、F10细胞培养基、F12细胞培养基和1640细胞培养基中的一种或几种。