[发明专利]基因重组的H9N1亚型禽流感病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因重组的H9N1亚型禽流感病毒，以及该病毒在制备预防H9N2亚型禽流感病毒感染的灭活疫苗的应用，该病毒已于2009年8月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国.武汉.武汉大学，其分类命名为流感病毒H9N1亚型A/Wuhan/Re-1/2009(H9N1)，保藏编号为CCTCC NO：V200913。

背景技术

禽流感(Avian Influenza，AI)是由禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)引起的禽类感染和/或疾病综合征。AIV在分类上属于：病毒界(Vira)...正粘病毒科(Orthomyxoviridae)...流感病毒属(Influenza Virus A and B)...禽流感病毒(Avian InfluenzaVirus)。AIV的基因组由8个单股负链RNA片段组成。根据表面蛋白抗原性不同，AIV被分为16个血凝素(HA)和9个神经氨酸酶(NA)亚型。HA是AIV主要的免疫原蛋白，它可以诱导机体产生抗体介导的特异性体液免疫应答，抗HA的抗体可以通过干扰病毒与唾液酸受体的结合或者病毒囊膜与内吞体膜的融合过程从而中和病毒的感染。H9N2亚型AIV于1966年首次在美国的火鸡中首次出现，目前在全球的野禽和家禽中广泛分布与流行。1998年，研究者首次从我国大陆的人体样品中分离到了H9N2禽流感病毒，之后从香港以及我国大陆的患者体内再次分离到了该亚型病毒；2003年和2007年，研究者多次从香港的患者体内分离到了H9N2禽流感病毒。H9N2禽流感病毒频繁感染人的事件，标志着该亚型病毒具有公共卫生意义。随着H9N2禽流感病毒对人类造成的威胁，人们已经意识到，阻止H9N2禽流感病毒向人群扩散的最有效的途径，就是有效的控制动物源性H9N2禽流感病毒。自1996年以来，我国养禽业一直受到H9N2禽流感的困扰，尤其是1998年，该病给我国养禽业造成了灾难性损失。鸡胚生产的H9N2全病毒灭活苗在养禽业的应用使该病的控制取得了较好的效果，但由于现地分离的野毒株鸡胚适应性差，致使现行使用的疫苗存在成本高、免疫期短等缺点；另外，用现行的疫苗免疫动物后，无法区分是免疫后或者野毒感染后产生的抗体。

为解决上述的难题，人们开发了标记疫苗(marker vaccine)或称之为DIVA疫苗(differentiating infected from vaccinated animals)，就是用一种疫苗给动物免疫后，通过与之相配套的血清学检测方法，可将免疫动物和自然感染动物区分开来。在1999-2001年意大利暴发H7N1禽流感期间，采用H7N3分离株制备成了灭活疫苗，接种鸡群后，动物产生了高效价的抗HA抗原的抗体，且能够完全抵抗H7N1禽流感病毒的攻击。同时，免疫动物产生了针对N3的NA抗体，借助于试剂盒可以将免疫家禽和感染家禽区分开来。利用这种标记疫苗意大利有效地消灭了由H7N1禽流感病毒引起的流行。在实施DIVA策略时，疫苗毒株的产 生是一个关键性的问题。目前，借助反向遗传学操作技术，可以方便地产生目的病毒毒株。

发明内容

本发明的目的是提供一种基因重组的H9N1亚型禽流感病毒，命名为A/Wuhan/Re-1/2009(H9N1)，该病毒具有高度鸡胚适应性，但对鸡及鸡胚无致病性；用该病毒作为毒种，在鸡胚中增殖并灭活后，制备成油乳剂灭活疫苗，对我国流行的H9N2亚型禽流感病毒具有特异免疫原性，另外，通过对免疫动物特异性的NA抗体的检测，可以区分免疫(H9N1)或野毒(H9N2)感染状况。

本发明的目的是通过以下的技术方案实现：基因重组的H9N1亚型禽流感病毒，其特征在于：其组成包括具有H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Hubei/C1/2007(H9N2)的HA基因以及H1N1流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的7个内部基因PB2、PB1、PA、NP、NA、M和NS，其保藏号为CCTCC-V200913。

该病毒已于2009年8月3日由中国典型培养物保藏中心收到，并登记入册。该培养物的存活性已于2009年8月31日检测完毕，结果为存活。

按上述方案，所述的HA基因具有序列表SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

按上述方案，所述的H1N1流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的7个内部基因PB2、PB1、PA、NP、NA、M和NS具有序列表SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。