[发明专利]一种艾滋病毒P24的单克隆抗体杂交瘤细胞及应用

说明书

技术领域

本发明涉及艾滋病毒(HIV)的检测技术领域，更具体涉及一种表达艾滋病毒P24蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞，同时还涉及一种HIV-1 P24的单克隆抗体在检测P24蛋白的ELISA检测方法中的应用(用于检测P24蛋白抗原的酶联免疫吸附检测(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELIS A)的方法)

背景技术

获得性免疫缺陷综合征，简称艾滋病(A IDS)，是由人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus，HIV)感染所引起的一种严重的传染性疾病。自1985年中国发现首例A IDS病人以来，呈加速流行的趋势，疫情正在从高危人群向一般人群传播。由于目前尚无有效的预防疫苗和根治艾滋病的药物，所以早期检测、早期治疗才能最大限度减少对社会的危害。HIV抗体检测是HIV感染病原学检测最常用的方法，但血清抗体的出现一般发生于病毒急性感染后的第2周到12周，在抗体未产生之前或者没有检测到抗体出现的这个时期称为感染后的“窗口期”。此期间用一般的检测方法不能作出诊断，但在这段时间，感染了HIV的人可将HIV传染给他人而自己没有任何病征，而成为HIV的传染源。窗口期包含两个方面的意义：一是在此期机体自身是否真正针对HIV产生特异性的体液免疫而产生HIV抗体，微生物感染机体后1周左右最先产生IgM抗体，随后出现IgG；二是如果有抗体产生，但是所使用的抗体检测试剂敏感度不够，仍检测不出抗体，也被归为处于窗口期。可见提高检测HIV抗体试剂的敏感性对尽早关闭窗口期仍有重要意义。纵观HIV抗体酶联免疫诊断试剂的发展，20世纪80年代初第一代诊断试剂的窗口期大约是3个月；到80年代中期，由于使用重组合成多肽抗原，敏感性比第一代试剂有所提高，窗口期平均比第一代试剂缩短20天；为进一步提高试剂的敏感性，1994年发展了第三代HIV抗体初筛试剂，反应模式由第一代和第二代的间接法改变为双抗原夹心法，酶标记物由抗人IgG改变为特异性HIV抗原，可以检测HIV不同的抗体亚类，包括IgG、IgM、IgA等，第三代试剂比第二代试剂检出HIV抗体的时间提前4～9天；90年代末有了第四代试剂，同时检测HIV1/2/O抗体和p24抗原，称为HIV抗原/抗体试剂，抗体部分检测的敏感性和特异性与第三代试剂持平，由于加入抗原的检测可将窗口期缩短到感染后的14天。

第四代检测试剂的出现，其最主要的特征在于原有的抗体检测基础上增加了对于抗原的检测手段。在窗口期，病毒抗体不能被检出，但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。抗原能够在个体感染后先于血清转化2～18天被检测到，因此通过检测p24抗原可以作为早期辅助诊断HIV感染的一种方法。HIV p24抗原检测主要有酶联免疫分析(EIA)、放射免疫分析(R IA)、免疫荧光分析技术(IFA)、免疫吸附电镜法(ISEM)等技术。其中以EIA为基础的测定p24抗原技术是检测HIV感染的常规方法。随着技术的进展，检测灵敏度不断提高，目前，p24抗原检测在以下几方面都有重要应用：HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；监测病程进展和抗病毒治疗效果。窗口期的各种检测技术有助于HIV感染者的早发现、早诊断、早治疗，以遏制艾滋病的流行，减少艾滋病对个人、家庭及社会的危害。