[发明专利]应用AS-PCR检测牛尿苷酸合酶缺乏症的方法

说明书

技术领域

本发明属于动物疾病检测技术领域，具体属于一种牛尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)检测技术领域， 涉及应用AS-PCR检测牛尿苷酸合酶缺乏症的方法。

背景技术

牛尿苷酸合酶缺乏症(Deficiency of uridine monophophate synthase，DUMPS)是一种常染色体隐性遗传 疾病，会造成母牛流产、死胎、整个牛群的繁殖力下降、产奶量下降等。由于人工授精技术的广泛应用， 使DUMPS在全世界流传，直接影响了奶牛业的经济效益。DUMPS的病因主要是由于编码尿苷酸合酶的 基因，在密码子405处存在C/T的突变，从而造成原编码精氨酸的密码子CGA转变为终止密码子TGA， 因而转录产物最终只能翻译成一段C-末端缺失76个氨基酸催化亚基的短蛋白，该残缺蛋白不能催化乳清 酸转化为鸟苷酸，故不能合成DNA、RNA所需的嘧啶核苷酸，导致胚胎在妊娠40～60d死亡，死亡率高 达100％[1][2]。美国等国家根据DUMPS的致病机制，建立了DUMPS的分子检测方法和育种方案，要求 对荷斯坦种公牛必须进行隐性遗传疾病的检测。据报道美国大概有2％的荷斯坦奶牛携带DUMPS的致病 基因[3]。我国荷斯坦种公牛主要从美国、加拿大、德国、以及澳大利亚和新西兰等国进口，包括进口的活 牛和胚胎。以前我国对该疾病没有足够的认识和重视，引入了大量潜在的DUMPS携带者，同时引入的大 量没有系谱资料的荷斯坦母牛，同样是潜在的携带者。这些引进的种公牛在我国的大量使用，使得我国的 DUMPS携带者数目增加，由于没有自主产权的检测技术，因而无法公布母牛的检测结果，很难根据系谱 推断DUMPS的传播途径。我国针对遗传性疾病展开的工作刚刚起步，在奶牛实际育种中开展的工作还不 多，并且仅局限在实验室中[4]，我们应该在生产实践中及时检测出冷冻精液及母牛中DUMPS的携带者并 予以淘汰，以减少经济效益的损失。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷，寻找一种简便有效的用于牛尿苷酸合酶缺乏症的检测方 法。

实现本发明的技术路线如下所示：

本发明建立了一种快速、准确检测牛尿苷酸合酶缺乏症的AS-PCR方法，其具体步骤如下：

(1)引物设计：根据GenBank提供的牛UMPS序列(登录号：NC_007299)，根据AS-PCR的特性， 利用生物学引物设计软件Premier 5，设计了AS-PCR扩增引物。该引物由上海生工生物工程技术服务有限 公司合成。该引物序列详见具体实施方式中的实施例1。

(2)AS-PCR：提取牛血样基因组DNA，根据PCR扩增可直接判断结果。若个体扩增出的目的片段为 261bp(见SEQ ID NO：1)，则为致病纯合子；若扩增出的目的片段为261bp和90bp，则为杂合子，即 DUMPS疾病携带者；若扩增的目的片段为90bp(见SEQ ID NO：2)，则为健康个体(见序列表SEQ ID NO：1和2)。

与现有技术相比，本发明的积极效果是：

提供了一种快速准确筛选分型DUMPS的方法和特异性引物，直接应用于牛开展DUMPS的致病基因 筛选，以利于DUMPS患病个体的早期淘汰。

附图说明

序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2是本发明扩增的牛尿苷酸合酶缺乏症的目的片段，SEQ ID NO： 3-6是扩增牛尿苷酸合酶缺乏症基因UMPS的特异引物。

图1：是本发明的技术流程图。

图2：用血样DNA对UMPS基因进行AS-PCR扩增，琼脂糖检测电泳图。琼脂糖凝胶浓度为2％。图中编 号说明如下：1，2，3，4泳道为健康牛群基因型，扩增的产物长度为90bp；5为隐性携带者牛群基因型， 扩增的产物长度为261bp和90bp；M为MarkerI(600bp)。

图3：是本发明扩增的牛尿苷酸合酶缺乏症的目的片段，图中下划线的序列是扩增的261bp片段和90bp片 段的共用区。

具体实施方式

下面结合实施实例并对照附图对本发明作进一步详细说明。

实施例1：牛尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)基因型鉴定

1、奶牛血样的采集及处理