[发明专利]水稻愈伤组织质量评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及水稻质量评价技术领域，更具体涉及水稻愈伤组织质量评价方法。该方法适用于所有水稻。

背景技术

在水稻组织培养以及其他物种的组织培养研究过程中，我们要进行培养基对愈伤组织的生长率和生长质量进行评估，为培养基筛选和设计提供依据，对生长率进行评价很容易进行，只要计算愈伤继代前后的重量比值即可，但是对愈伤质量进行评价就要有相应的模型，在此之前还没有这种模型被建立。这就给培养基的综合评估带来了问题。所以本发明是建立了愈伤组织评价的模型，主要对愈伤组织质量相关的四个形状进行评估、统计，将愈伤组织的质量进行量化，这样就有利于对愈伤组织的质量进行量化评比，使得我们对培养基的研究更为严谨，方便。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种水稻愈伤组织质量评价方法，该方法首次建立了水稻愈伤组织的评价模型，评价结果和转基因效率基本一致，模型的建立有利于实验和生产的评估，比较和质量控制。本评价模型得分低于70以下愈伤组织质量较差，分化率不高，也很难进行转基因操作；得分在70-90之间的愈伤组织已经适合分化，可以得到较高的分化率，仍得不到较高的转化率，很难转化成功，得分大于90的愈伤组织适合农杆菌转化操作，也有最高的分化率。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种水稻愈伤组织质量评价方法，其步骤是：

1)、本评估系统以愈伤组织颗粒，愈伤组织色泽，愈伤组织是否水化，愈伤组织是否有分化趋势共四个指标做为评价指标。

2)、颗粒指标(P)：愈伤组织颗粒根据愈伤组织生长的具体情况分为：1，颗粒散碎，硬度低；2，颗粒致密，硬度高。

3)、如步骤2)所描述颗粒散碎定义为：愈伤组织的直径小于3mm，容易松散，不紧密，并且愈伤组织表面毛刺状不平滑，切片特征为愈伤组织断裂处较多，愈伤组织边缘不清晰，切片观察如图.11。颗粒致密定义为：愈伤组织直径大于3mm的颗粒，颗粒致密硬度高不宜松散，愈伤组织表面光滑状，切片观察为细胞致密，胞质密度高，愈伤组织边缘清晰，愈伤组织组织的外层细胞结构明显。

4)、愈伤组织色泽指标(C)：根据愈伤组织生长的具体情况分为五个等级，1，苍白；2，黄白；3，黄；4，深黄；5，褐。如果一块愈伤组织上有一点出现黑(褐)点，则这块愈伤组织的整体色泽特征定义为”褐”，如果愈伤组织上有一点出现苍白特征，这块愈伤组织整体特征将定义为”苍白”。愈伤组织具有苍白特征则往往和水化特征相连，愈伤组织质地变软，细胞死亡。

5)、如步骤4)所描述的5个颜色指标，以R，G，B颜色系统定义如下表：观察光源为日光灯管，色温：6500度，亮度500lux；

6)、愈伤组织水化(H)：1，愈伤组织水化：愈伤组织出现发白，发软，惨白死亡的现象；切片特征为愈伤组织的表面层愈伤组织糜散，如图.15：2，愈伤组织无水化：愈伤组织坚硬没有出现水软的现象。切片观察可见愈伤组织表层细胞层清晰。有明显的表层致密层结构，如图.12。

7)、愈伤组织有分化趋势(D)：1，愈伤组织有长出根状分化的特征，切片观察为愈伤组织表层愈伤组织的致密层变薄或消失，愈伤组织内部有跟源基发生，如图.1，图.16；2，愈伤组织正常无分化趋势：切片观察愈伤组织表层有明显的致密层愈伤组织，愈伤组织内部细胞大小和结构较均匀，没有明显的区域结构。愈伤组织分化趋势使得下一步的继代开始容易褐化，而且有分化趋势的愈伤组织转基因没有效率。侵染后很快死亡。

8)、颗粒指标(P)的权重系数Pc＝15；愈伤组织色泽(C)的权重系数Cc＝25；愈伤组织水化(H)的权重系数Hc＝40；愈伤组织分化趋势(D)的权重系数Dc＝20；Pc+Cc+Hc+Dc＝100。

9)、颗粒系数(P)的状态1，颗粒散碎的得分系数P1＝0；P2＝1。P1所占的比值P1p，P2所占的比值P2p；P1p+P2p＝1。

10)、愈伤组织色泽指标(C)的得分系数定义为：C1＝-1；C2＝0.75；C3＝1；C4＝0。75；C5＝-1。C1的比例分数C1p；C2的比例分数C2p；C3的比例分数C3p；C4的比例分数C4p；C5的比例分数C5p；C1p+C2p+C3p+C4p+C5p＝1。

11)、愈伤组织水化指标(H)的得分系数：H1＝-1；H2＝1。H1的比例分数H1p；H2的比例分数H2p；H1p+H2p＝1。

12)、愈伤组织分化指标(D)的得分系数：D1＝-1；D2＝1。D1的比例分数D1p；D2的比例分数D2p；D1p+D2p＝1。

13)、愈伤组织质量得分的计算方法是：