[发明专利]一种融合蛋白免疫抑制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种融合基因，其特征在于，它由具有序列表中序列3所示核苷酸序列的编码sHLA-G的α1-α3区的基因、连接片段和具有序列表中序列4所示核苷酸序列的编码人IgG的CH1-CH3区的基因依次连接构成。

2.根据权利要求1所述的融合基因，其特征在于所述的连接片段是GAATTC，GAATTC，GGATCC，GATATC，TCTAGA或GGTACC。

3.根据权利要求1或2所述的融合基因，其特征在于，它具有序列表中序列1所示的核苷酸序列。

4.权利要求1至3中任一项所述融合基因表达的融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，它具有序列表中序列2所示的氨基酸序列。

6.一种融合蛋白的制备方法：包括以下步骤：

步骤一：选择HLA-G5-pcDNA3.0质粒与正常人外周血细胞分别获取sHLA-G重链胞外段α1-α3区基因与人IgG1重链恒定区(IgG-Fc段)的编码基因，将IgG-Fc的基因片段插入真核表达质粒pcDNA3.1+中形成pcDNA3.1+/[IgG-Fc]，再将sHLA-G胞外段基因重组到pcDNA3.1+/[IgG-Fc]中，构建含有融合基因的pcDNA3.1+/[sHLA-G/IgG]真核表达载体，并转染到HLA I类分子重链基因缺陷但高表达HLA I类分子轻链的721.221细胞中表达；

步骤二：筛选高效表达的稳定转染细胞，通过单克隆化与ELISA鉴定，选择出表达量最高的单克隆细胞；

步骤三：通过大量扩增单克隆细胞，获取含融合蛋白sHLA-G/IgG的细胞培养上清，通过30kDa的centricon超滤器进行超滤，浓缩20倍后，过滤除菌，通过蛋白A亲合层析柱浓缩、纯化。

7.一种真核表达载体，其特征在于，它包含权利要求1至3中任一项所述的融合基因。

8.包含权利要求7所述的真核表达载体的宿主细胞。

9.权利要求4所述的融合蛋白在制备免疫抑制剂类药物中的应用。

10.权利要求5所述的融合蛋白在制备免疫抑制剂类药物中的应用。