[发明专利]一种虫草制品中虫草酸含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种虫草制品中虫草酸含量的检测方法。

背景技术

虫草酸(cordycepic acid)，即甘露醇，是冬虫夏草等虫草菌类中药中的主要活性成分 之一，具有利尿、降低颅内压和眼内压、祛痰、镇咳平喘和清除自由基等多种功效。就冬虫 夏草及其相关制品中的虫草酸含量的检测方法，目前有多种方法包括容量法、紫外-可见分 光光度法、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)以及毛细管区带电泳法(CZE)等。据 2005年中国药典，虫草酸的含量是采用容量法来进行定量分析。容量法是基于甘露醇的还原 性利用氧化剂高碘酸盐来滴定和计算含量，因冬虫夏草等虫草菌类生药或制品中还原性物质 的干扰，测量值偏高，因此容量法仅适用于相对较纯的甘露糖制剂。HPLC、GC与CZE等分析 方法需要贵重的设备、样品制备和操作复杂、受外界干扰也大，结果重现性较差，不适合作 为常规定量分析方法。紫外可见分光光度法检测虫草酸，方法简单、特异性高，许多含羟 基的单糖对其无明显干扰，能代表冬虫夏草等虫草类生药或制品中虫草酸的实际值而成为常 规定量分析方法。然而，紫外可见分光光度计一般最多能同时测定3个样品，如果每个检测 样品要设置3个重复，则一次只能检测一个样品。因此对批量样品的定量分析因受检测系统 和人为因素造成误差，严重影响结果的稳定性和重现性。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种能同时大批量测试样品且受外界干扰也小的虫草制品中虫 草酸含量的检测方法。采用简单的方法和价格低廉的设备实现同时对大批量虫草制品中虫草 酸含量的检测，且检测结果稳定性和重现性好，适合作为常规定量分析方法。

本发明的技术方案：一种虫草制品中虫草酸含量的检测方法，该方法是先将虫草制品按 常规方法制成待检液；然后将待检液制成测试液，用酶标仪检测测试液的吸光度；再将虫草 酸配制成5～7个浓度的标准溶液，并测定其吸光度；以标准溶液浓度为横坐标，吸光度值为 纵坐标，绘制虫草酸的标准曲线，并建立相应的虫草酸浓度与吸光度的线性关系方程，再把 测试液的吸光度值代入方程获得测试液中虫草酸的含量，然后换算成虫草制品单位质量的百 分含量。

上述的虫草制品中虫草酸含量的检测方法中，所述测试液按如下步骤制备：

a、量取0.2mL用虫草制品制备的待检液放入试管中；

b、在测试液中分别加蒸馏水或去离子水稀释至20mL，混匀；取1mL作为A品；

c、在A品中加入1mL高碘酸钾溶液，混匀，在24～26℃放置10分钟，得B品；

d、在B品中加入2mL 0.1％的L-鼠李糖溶液，混匀，得C品；

e、在C品中加入4mL新鲜配制的Nash试剂，53℃反应15分钟使其显色后，快速冷却至室 温，得测试液。

f、在按步骤b～e制备的过程中，取与待测液等量的蒸馏水或去离子水制备空白对照组

前述的虫草制品中虫草酸含量的检测方法中，所述吸光度按如下步骤测定：

a、用加样枪取测试液组和空白对照组至酶标板，每组三个复孔，每孔200μL；在412nm 波长下，用酶标仪分别测定测试液和空白对照的吸光度，计算三孔测试液的平均吸光度值A 测和三孔空白对照的平均吸光度A本底；

b、根据公式A_虫＝A_测-A_本底计算测试液中虫草酸实际吸光度。

前述的虫草制品中虫草酸含量的检测方法中，所述标准溶液按如下步骤制备：

a、准确称量25mg干燥至恒重的虫草酸装入25mL容量瓶中，加蒸馏水或去离子水溶解并 稀释至刻度，混匀，配置成质量浓度为1g/L的虫草酸溶液；；

b、量取5～7个间隔为250μL质量浓度为1g/L的虫草酸溶液，分别加入25mL容量瓶中， 用蒸馏水或去离子水定容至刻度，分别得5～7个间隔为10mg/L虫草酸含量的标准溶液，备 用；

c、再取1mL浓度为10mg/L的标准溶液，按照权利要求1和2的步骤获得10mg/L标准溶液 的平均吸光度值；

d、再分别取1mL b步骤获得的标准溶液，按步骤c测定各浓度标准液相应的平均吸光度 值。