[发明专利]一种检测三聚氰胺含量的胶体硒试纸条

说明书

一、技术领域

本项发明为一种检测三聚氰胺含量的胶体硒试纸条。具体来说是一种利用单克隆抗体技术、硒标抗体技术和免疫层析技术组装起来的可快速检测血清、尿液、牛奶等样品中三聚氰胺的半定量试纸条，属于生物技术领域。

二、背景技术

三聚氰胺(Melamine)，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂的原料用于制造日用器皿、装饰贴面板、织物整理剂等。

已有研究表明，长期摄取三聚氰胺可能造成人体或动物生殖能力损害、膀胱或肾结石、甚至导致膀胱癌。

2007年，美国爆发宠物食品受污染事件，造成部分宠物猫狗发生严重肾衰竭而死亡。事后经调查表明：导致宠物中毒的原因主要是因为宠物食品掺杂了≤6.6％三聚氰胺的小麦蛋白粉。

2008年9月，中国爆发三鹿婴幼儿奶粉受污染事件，导致食用了受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症，其主要原因就是奶粉中含有严重超标的三聚氰胺。随后在奶糖、油条、鸡蛋等食品中也发现含有三聚氰胺，给人们身体健康造成严重威胁。

因此人体内、食品中及畜产品中残留的三聚氰胺含量检测已经成为食品安全和人身健康的一项常规检测指标，日益受到重视。

现有的检测三聚氰胺的方法主要是用色谱法如GC-MS、HPLC、HC-MS等，但是这些方法需要完备的实验室、专门的操作人员、昂贵的分析仪器、繁杂的检测步骤和不菲的检测费用，不适合现场进行大批量的快速检测，更不适合用于普通的家庭自检使用。因此亟需开发一种灵敏性高、检测迅速、特异性高、成本低廉、适合现场即时检测的三聚氰胺检测方法。而目前基于免疫学原理的ELISA三聚氰胺检测试剂盒，依旧没能摆脱仪器的束缚，费用也较高，耗时需要1-2个小时，再加上它用的是多克隆抗体，特异性并不高。

本项发明则是基于免疫学原理，研发出针对三聚氰胺的单克隆抗体，再研制成硒标三聚氰胺快速检测试纸条。该试纸条具有特异性强、灵敏性高、检测速度快、不需要任何仪器设备、不需要专业人员操作、运行费用低廉、携带方便等特点，可快速检测血清、尿液、牛奶等样品中三聚氰胺，尤其适合现场样品的即时快速检测和家庭自检使用。

三、发明内容

本发明为一种检测三聚氰胺含量的胶体硒试纸条，它是一种半定量快速检测试纸条。其原理是用抗三聚氰胺单克隆抗体检测待检样品中的三聚氰胺，从而提高了检测的特异性、灵敏性，避免了已有的ELISA检测试剂盒所采用的普通抗三聚氰胺抗体检测三聚氰胺时特异性和灵敏性差的不足。利用胶体纳米硒颗粒标记抗三聚氰胺单克隆抗体，提高了其检测结果可视性，进一步提高了灵敏性，并且胶体纳米硒颗粒制备要求并不如胶体纳米金严格，降低了制备该试纸条有效性所需要求条件，拓宽了试纸条有效性检测所需条件范围，摆脱了特定仪器的束缚，降低了成本要求，使得该试纸条的使用对象更加大众化。

在本项发明中，首先通过用三聚氰胺免疫抗原MEL-KLH(三聚氰胺偶联血蓝蛋白)免疫小鼠，获得能分泌抗三聚氰胺抗体的小鼠脾细胞，让其与事先驯化好的SP2/0细胞融合，采用有限稀释法进行筛选单克隆细胞并扩大培养，然后将筛选出来的分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的融合细胞注射小鼠，使其产生腹水。采集腹水，进行抗体提纯即可获得抗三聚氰胺单克隆抗体。

其后以亚硒酸和抗坏血酸为原料制得胶体纳米硒颗粒，按照最佳条件将抗三聚氰胺单克隆抗体进行胶体纳米硒标记。将硒标抗三聚氰胺单克隆抗体喷涂在硒标结合区的玻璃纤维上，将一定浓度(10μg/L)的三聚氰胺包被抗原MEL-BSA(三聚氰胺偶联牛血清白蛋白)喷涂在反应显色区上，同时在质控带上则喷涂一定浓度的羊抗鼠IgG抗体。将支撑板、喷涂有三聚氰胺包被抗原MEL-BSA的检测带和羊抗鼠IgG抗体的质控带的硝酸纤维素滤膜、喷涂有硒标抗三聚氰胺单克隆抗体的玻璃纤维、吸水垫的滤纸和采样区的玻璃纤维按照说明书附图1顺序组装好。