[发明专利]白及药材的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及白及药材的质量控制方法，特别是涉及白及药材的含量测定方法。

背景技术

白及药材为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，味苦、甘、涩，性微寒，具有收敛止血、消肿生肌之功能，是一种常用的中药药材，用于貂胰防裂膏，骨伤灵喷雾剂等中成药中。随着现代药理学研究的不断深入，发现其对结核杆菌、肿瘤细胞等有明显抑制作用。临床发现，白及药材还对常见病如体内外出血症、烧烫伤等具有较好疗效。但是，作为药品领域的原料药材，其有效成分的含量必须达到某一标准，否则，会大大影响其在药品领域的应用价值以及原药材制作成药品的质量。目前尚没有关于白及药材质量控制方法中的含量测定方法的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种白及药材的含量测定方法，能方便、快捷、准确的对白及药材中的有效成分进行含量测定。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

本发明白及药材的含量测定方法是以双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯为对照品，用高效液相色谱法测定白及药材中双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)的含量。

具体的，上述高效液相色谱法由以下步骤组成：

(1)色谱条件和系统适用性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶水＝37∶63(体积比)为流动相，检测波长为225nm，柱温40℃，理论塔板数按双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯计算不低于5000；

(2)对照品溶液的制备：精密称取双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品，加70％甲醇溶液制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：精密称定白及药材粉末0.1g，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，冷浸12小时，再超声处理30分钟，放至室温，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱，测定，用外标一点法计算含量，即得。

前述方法中，按白及药材干燥品计算，双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)的含量不少于1.50％(重量)。

发明人进行了大量的试验研究及方法验证，得到了上述技术方案，具体如下：

一、含量测定研究：

(1)含量测定指标的选择：发明人对白及药材的化学成分进行了试验研究，结果从中分离和制备出含量较高、专属性较强的具有抗癌活性的化合物双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)，故选择双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)为含量测定指标。

(2)仪器与试药：安捷伦1100高效液相色谱系统，包括四元梯度泵、可变波长检测器、二极管阵列检测器、自动进样器、7725i手动进样阀及Chemstation工作站；TCQ-250超声波清洗器；色谱柱，Symmetry C₁₈(5μm，150mm×4.6mm，Waters公司)；双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)对照品(贵州省中药、民族药研究开发中心制备，纯度大于98％)；甲醇为色谱纯、水为重蒸馏水。

(3)试验条件选择：

提取方法：采用70％甲醇为溶剂，进行超声、浸渍、再超声提取。经方法学验证，该方法可行。

二、含量测定条件

检测波长的选择：根据双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)对照品的HPLC-DAD测定的结果，其在225nm处有最大吸收，故选择225nm作为检测波长。