[发明专利]提高隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测回收率的过滤浓缩方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种水质监测技术领域的方法，具体是一种提高隐孢子虫和贾第鞭毛虫 检测回收率的过滤浓缩方法。

背景技术

隐孢子虫(Cryptosporidium)和贾第鞭毛虫(Giardia)是2种严重危害水质安全的致 病性原生动物。2007年7月1日实施的《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)与之前的标准 相比在微生物指标部分增加了对贾第鞭毛虫、隐孢子虫的检测，其中明确规定隐孢子虫、贾 第鞭毛虫的标准限值，即＜1个/10L。

经过对现有技术的检索发现，目前国际上最为常用的水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫标准检 测方法是EPA1623方法，用EPA1623方法来检测两虫(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)主要有三个步 骤，分别为过滤浓缩、免疫磁性分离(IMS)和免疫荧光(IFA)镜检。该方法存在的主要问题是 测试成本高、回收率低。通常测试一个水样的成本为2025元左右，其中采样过滤阶段使用的 一次性进口滤囊的成本就高达1300元，占检测成本的三分之二。而使用该方法所能达到的两 虫回收率通常只有20％左右，为EPA1623中规定的最低限值。通过对EPA1623方法的3个主要步 骤的分步研究发现，两虫测试过程中，回收率主要损失在过滤浓缩阶段，而免疫磁分离和免 疫荧光检测这两个步骤相对损失则非常小。按EPA1623方法，水样经滤囊过滤后加入洗脱液 ，采用震荡洗脱的办法将滤膜上的两虫洗脱下来。进一步的试验证实，这种机械性的震荡洗 脱难以彻底将两虫从滤膜表面洗脱下来，从而导致两虫回收率损失较大。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种提高隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测回收率 的过滤浓缩方法，通过对过滤浓缩阶段某些操作步骤进行改进，以达到降低隐孢子虫和贾第 鞭毛虫测试成本和提高回收率的目的。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤：

第一步、将滤囊的两端分别密封连接橡皮管，并将一根橡皮管放入待测水样中，另一根 橡皮管与真空泵密封连接，启动真空泵开始采样过滤。

所述的采样过滤是指：用计量泵将真空泵的流速调整至2L/min，采样时间为20min；

第二步、用密封盖密封滤囊的出水口，在滤囊的进水口中倒入150mL洗脱液，然后再次 密封滤囊的进水口。

所述的洗脱液的组分及质量百分比含量为：1％表面活性剂、1％三羟甲基氨基甲烷、0.2％ 乙二胺四乙酸、1.5％消泡剂，余量为纯水。

所述的消泡剂为有机硅氧烷类消泡剂、聚醚类消泡剂或酰胺类消泡剂中的一种。

第三步、将两端密封的滤囊放入盛有40℃温水的超声装置中，设置超声频率为 40kHz-60kHz，超声震荡时间为15分钟。

第四步、将滤囊取出并打开滤囊的进水口并倒入离心管中开始离心处理，待离心处理结 束后依次采用免疫磁性分离法进行染色制片后用荧光显微镜计数，统计回收率。

本发明适用于所有的水源水和出厂水的水样检测，采用国产率囊+超声洗脱的方式替代 EPA推荐使用的Envirochek囊式滤器和滤囊振荡器，可使测试一个水样的成本降低为865元， 较EPA1623方法下降1160元左右。

EPA1623规定使用的滤囊振荡器只能达到上下振动的效果，因此需要每5分钟调节一次滤 囊在振荡器上的方向，操作复杂且洗脱效果不佳。采用超声洗脱可通过空化效应产生的气泡 不断作用在滤膜表面，使截留在滤膜表面的两虫得到彻底的洗脱。两种洗脱方法对比发现超 声洗脱效果更佳，具体表现为可使两虫(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)的回收率可提高10％以上 。通过对超声频率、时间和水温的控制，可以得到两虫洗脱效果的最佳条件。

附图说明

图1为实施例测试环境示意图。

图2为实施例收率示意图。

图3为实施例6效果示意图。

图4为实施例7效果示意图。

图5为实施例8效果示意图。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施， 给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1