[发明专利]一种核酸快速释放试剂和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸快速释放试剂和方法。

背景技术

目前，核酸提取方法主要经历了三个发展阶段：液体方法-离心柱方法-磁珠法。液体方法提取核酸，因其需要氯仿、苯酚等毒性大的有机溶剂而基本废弃；离心柱方法是目前使用最广泛的，相对于液体方法，提取步骤简单；磁珠法是近几年才发展起来的核酸提取方法，其系列试剂不含氯仿、苯酚等毒性大的有机溶剂，相对于离心柱方法，提取步骤更简单，不需要离心，易于实现自动化，不过产使用的系列试剂产品基本上为国外所垄断，价格非常昂贵，从而限制了其在我国的广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用安全，操作简便，制造成本较低的核酸释放试剂和方法

本发明之核酸释放试剂由0.01～0.5mM/L(与KCl水溶液的质量体积比)的表面活性肽溶解于50～200mM/L的KCl(氯化钾)水溶液，0.01％～2％(与无菌水的质量体积比)的SDS(十二烷基磺酸钠)、LLS(Lithium lauryl sulfate，十二烷基硫酸锂)、或Chelex-100(Chelex树脂)，以及0.05％～1％(体积)的乙醇组成。

配制方法：以无菌水、KCl配制50～200mM/L的KCl溶液，加入表面活性肽，使表面活性肽浓度达到0.01～0.5mM/L，加入0.01％～2％(质量体积比)的SDS、LLS或Chelex-100，加入0.05％～1％(体积比)的乙醇，混匀，即配成本发明之核酸释放试剂。

所述百分比以无菌水体积为计算基准。

本发明之核酸释放方法是：取所述核酸释放试剂，根据不同的实验目的，用无菌水进行当量稀释，待平衡至室温后，混匀、分装至待测样品管，再加入待处理样本，待处理样本与核酸释放剂可以是任何比例，较优选的体积比为：待处理样本∶核酸释放剂＝1∶1～3；用移液器反复吸打5-10次，核酸即得到有效地释放。

本发明之核酸释放剂同时能抑制Dnase和Rnase活性，且不对后续实验产生影响。

所述核酸包括DNA和RNA。

本发明之核酸释放试剂采用强烈的蛋白变性剂，快速破坏病原体外壳蛋白结构，释放出病原体核酸，无需加热，无需离心，只需一个移液器，即可完成DNA、RNA的释放和提取。

本发明之核酸释放方法，可快速释放血清、血浆、尿液、棉拭子、细菌、真菌、组织、植物、口腔细胞、PCR反应产物、法医学样品及环境样品中的核酸，释放的核酸可用于检测、克隆、序列分析、PCR扩增、分子杂交和cDNA合成等下游实验。

与目前已有的核酸提取方法相比较，本发明无需加热，无需离心，操作格外简便，接近自动化的操作保证了实验结果稳定，避免人工操作引起的差异及错误，可广泛应用于病原微生物的检测，法医学鉴定，组织和血液分型，基因突变的检测等领域。

附图说明

图1(a)为本发明核酸释放试剂及核酸释放方法用于检测HBV DNA标准品的荧光定量PCR扩增曲线；

图1(b)为本发明核酸释放试剂及核酸释放方法用于检测HBV DNA标准品所作标准曲线；

图2为本发明核酸释放试剂及核酸释放方法用于重复性检测HCV RNA阳性样本的荧光定量PCR扩增曲线；

图3为本发明核酸释放试剂及核酸释放方法用于检测沙眼衣原体(CT)阳性样本的荧光定量PCR扩增曲线。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1用于HBV DNA的荧光定量PCR检测实施例

核酸释放试剂配制：0.1mM/L的表面活性肽溶于80mM/L KCl无菌水溶液，加入0.1％(质量体积比)SDS、0.5％(体积)乙醇。所述百分比以无菌水体积为计算基准(下同)。

HBV DNA的荧光定量PCR检测：用带滤芯吸嘴吸取5微升所述核酸释放试剂、5微升待测样本(标准品、阴性、阳性对照，未知浓度的HBV DNA阳性的血清或血浆)，加入PCR反应管中，移液枪头吸打5次，混匀，静置约5min后，用带滤芯吸嘴吸取40微升已配好的PCR反应液，于Stratagene Mx3000P或ABI7300/7500系列PCR仪上进行实时荧光定量PCR扩增。

PCR反应各成分浓度及比例如下：