[实用新型]一种快速miRNAs定量PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速miRNAs定量PCR检测试剂盒。

背景技术

miRNAs是一类非编码、内源性的小RNA，生物体内源长度约20～23个核苷酸(nucleotides，nt)，miRNAs由基因组DNA编码，在细胞核内由RNA聚合酶II转录为几百个核苷酸(nt)的初级转录本(pri-miRNA)。该茎-环结构的pri-miRNA被RNase III家族成员Drosha剪切成约70nt的发夹结构前体pre-miRNA。随后pre-miRNA被转运出细胞核，并进一步由胞浆的RNase III家族成员Dicer加工成miRNAs。植物中miRNAs的作用策略与siRNA类似，即通过碱基精确配对方式结合于靶mRNA的3’-UTR或开放阅读框，导致靶mRNA转录沉默。但绝大多数哺乳动物miRNAs则通过部分碱基配对结合于靶mRNA的3’-UTR，导致靶mRNA的特异性剪切或转录阻遏。miRNAs对转录后水平的基因调控广泛存在于真核生物的发育和代谢过程，包括细胞凋亡、细胞增殖、细胞分化、脂肪代谢、胰岛素分泌、免疫调节、应激反应等，并呈现时空表达特异性。miRNAs在人类基因组中miRNAs基因占据大约1％的数量，虽然在不同的时空发育阶段，它们的表达量不同，但是多种miRNAs在同一个细胞中的表达使得细胞处在一种内在的miRNAs环境中，这个环境控制着成千上万的编码基因的miRNAs水平，使得各种蛋白的表达处在一个适合的水平。miRNAs为非编码基因，无poly(A)尾，在进化上保守，并广泛存在于动物、植物、真菌及病毒基因组中。目前在人类中已发现695条miRNAs分子，但科学家预测人类基因组可能含有约1000条特异的miRNAs，它们调控近30％的基因表达。最近，研究发现许多miRNAs基因定位于与疾病相关的基因位点附近，并在肿瘤发生过程中有差异表达，而有的miRNAs可以作为早期癌症检测的生物标记。快速检测不同来源样品中miRNAs含量就成了人们研究中显得越来越重要了，但现有的一些检测技术，反应灵敏度、高重复性和高精确性还不能满足人们的需要。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种可用来快速检测不同来源样品中miRNAs含量，具有适用性更广、反应更灵敏、高重复性和高精确性的快速miRNAs定量PCR检测试剂盒。

本实用新型的目的通过以下技术方案来实现。

一种快速miRNAs定量PCR检测试剂盒，包括外盒体、内盒体，内盒体上设有承载孔，内盒体置于外盒体内，其特征在于：所述内盒体上的承载孔内放置有装有用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂的试剂瓶组、装有用于配制miRNAs逆转录反应体系的试剂的试剂瓶组和装有用于配制miRNAs qPCR反应体系的试剂的试剂瓶组，其中装有用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂的试剂瓶组包括装有rATP试剂的试剂瓶、装有poly(A)聚合酶试剂的试剂瓶、装有polyA polymerase Buffer试剂的试剂瓶和装有DEPC水的试剂瓶，装有用于配制miRNAs逆转录反应体系的试剂的试剂瓶组包括装有Universal RT Primer试剂的试剂瓶、装有dNTP试剂的试剂瓶、装有M-MLV试剂的试剂瓶、装有RT Buffer试剂的试剂瓶、装有RNasinInhibitor试剂的试剂瓶和装有DEPC水的试剂瓶，装有用于配制miRNAs qPCR反应体系的试剂的试剂瓶组包括装有Universal qPCRPrimer试剂的试剂瓶、装有SYBR Green Master Mix试剂的试剂瓶和装有灭菌蒸馏水的试剂瓶。