[实用新型]一种快速miRNAs Poly(A)聚合酶化试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速miRNAs Poly(A)聚合酶化试剂盒。

背景技术

miRNAs是一类非编码、内源性的小RNA，生物体内源长度约20～23个核苷酸(nucleotides，nt)，miRNAs由基因组DNA编码，在细胞核内由RNA聚合酶II转录为几百个核苷酸(nt)的初级转录本(pri-miRNA)。该茎-环结构的pri-miRNA被RNase III家族成员Drosha剪切成约70nt的发夹结构前体pre-miRNA。随后pre-miRNA被转运出细胞核，并进一步由胞浆的RNase III家族成员Dicer加工成miRNAs。植物中miRNAs的作用策略与siRNA类似，即通过碱基精确配对方式结合于靶mRNA的3’-UTR或开放阅读框，导致靶mRNA转录沉默。但绝大多数哺乳动物miRNAs则通过部分碱基配对结合于靶mRNA的3’-UTR，导致靶mRNA的特异性剪切或转录阻遏。miRNAs对转录后水平的基因调控广泛存在于真核生物的发育和代谢过程，包括细胞凋亡、细胞增殖、细胞分化、脂肪代谢、胰岛素分泌、免疫调节、应激反应等，并呈现时空表达特异性。miRNAs在人类基因组中miRNAs基因占据大约1％的数量，虽然在不同的时空发育阶段，它们的表达量不同，但是多种miRNAs在同一个细胞中的表达使得细胞处在一种内在的miRNAs环境中，这个环境控制着成千上万的编码基因的miRNAs水平，使得各种蛋白的表达处在一个适合的水平。miRNAs为非编码基因，无poly(A)尾，在进化上保守，并广泛存在于动物、植物、真菌及病毒基因组中。目前在人类中已发现695条miRNAs分子，但科学家预测人类基因组可能含有约1000条特异的miRNAs，它们调控近30％的基因表达。最近，研究发现许多miRNAs基因定位于与疾病相关的基因位点附近，并在肿瘤发生过程中有差异表达，而有的miRNAs可以作为早期癌症检测的生物标记。目前对这种miRNAs可检测的种类较少，而且后续操作较为复杂、缓慢。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种快速miRNAs Poly(A)聚合酶化试剂盒，使得可检测的miRNAs种类更多，后续操作更简化、更迅速。

本实用新型的目的通过以下技术方案来实现。

一种快速miRNAs Poly(A)聚合酶化试剂盒，包括外盒体、内盒体，内盒体上设有承载孔，内盒体置于外盒体内，其特征在于：所述内盒体上的承载孔上放置有装有用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂的试剂瓶组，该装有用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂的试剂瓶组包括装有聚合酶PAP试剂的试剂瓶、装有rATP试剂的试剂瓶、装有PAP Buffer试剂的试剂瓶和装有DEPC水的试剂瓶。

所述装有rATP试剂的试剂瓶中的rATP的体积规格为10μl、装有聚合酶PAP试剂的试剂瓶中的聚合酶PAP体积规格为20μl、装有DEPC水的试剂瓶中的DEPC水体积规格为200μl，装有聚合酶PAPBuffer试剂的试剂瓶中的聚合酶PAP Buffer 10×聚合酶PAP Buffer体积规格为20μl，盛纳各试剂的试剂瓶均为统一规格大小。

所述装有用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂的试剂瓶组还包括装有非编码的总RNA的试剂瓶，其中总RNA的OD₂₆₀/OD₂₈₀值在1.6～2.0之间，总RNA为将植物组织、叶片或动物组织或贴壁细胞或悬浮动物细胞、酵母或细菌进行研磨、匀浆、裂解后再提纯的RNA。

所述外盒体通过薄膜封装。

本实用新型与现有技术相比具有以下优点：

本实用新型由于在试剂瓶内装有用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂，该用于配制miRNAs Poly(A)聚合酶化体系的试剂包括聚合酶poly(A)polymerase(PAP)试剂、rATP试剂、PAP Buffer试剂和DEPC水，因此本实用新型便可以以rATP为底物，通过poly(A)polymerase(PAP)在miRNAs的3’端添加poly(A)尾，使得poly(A)化的miRNAs成为逆转录的模板，从而提供了为不同来源样品中miRNAs快速加poly(A)尾的方法，使得可检测的miRNAs种类多，后续操作更简化、迅速。