[实用新型]保持蛋白磷酸化状态的组织细胞裂解液提取装置

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种组织细胞蛋白裂解液的提取装置，尤其涉及一种保持蛋白磷酸化状态的组织细胞裂解液的提取装置，该装置在提取活体组织裂解液的过程中同时抑制磷酸酶，从而保持其中蛋白质的磷酸化状态。

背景技术

迅速裂解动物组织是寻找和研究生物标记、抗体、蛋白表达、蛋白相互作用以及ELISA和免疫沉淀等实验所必须的步骤。此外，生物体细胞内的磷酸化和去磷酸化的蛋白表达能揭示一系列生物现象，包括与细胞内信号传递、细胞凋亡、细胞分化和增殖相关联的分子开关。

目标蛋白通过蛋白激酶，在丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上转移磷酸基团，使得蛋白处理磷酸化状态，其键结合改变了蛋白的形态结构以及结合反应能力。蛋白的磷酸化检测被广泛应用于疾病的的体外诊断。

除具用专业分子生物实验的部门外，如：在医院镜检部门的口常活体组织检验过程中，都是预先一周内由专业分子生物实验室制备磷酸酶抑制剂，放入某种容器或试管内准备好，在使用时容器放置在冰上，预备在镜检的操作室内，或把活检组织直接投入液氮。其制备过程繁琐并会对镜检部门原有的设置和条件产生影响，此外，配制的磷酸酶抑制剂易受空气中酸性物质(如：二氧化碳等)的影响而使得其对酶的抑制失效，或者在从液氮中复苏，蛋白磷酸化的状态也会有很大变化。由于采集到的活体组织又需要快速裂解，以稳定其中蛋白质的磷酸化状态，而磷酸酶抑制剂不宜长期保存，在检测过程中组织裂解液当中的磷酸化蛋白状态易发生改变，都影响了被检测的蛋白磷酸化水平。

实验室配制的磷酸酶抑制剂其保存时间通常为两周左右，当其暴露于空气中时，其抑制效果会显著下降。GENMED公司提供一种磷酸酶抑制剂混合液，包括氟化钠(Sodium Fluoride)、钒酸钠(SodiumOrthovanadate)、焦磷酸钠(Sodium Pyrophosphate)和甘油磷酸(Glycerophosphate)等化合物实现对组织提取液中磷酸化酶的抑制，使样品中的各类蛋白质处理原始的生理状态。在4℃温度下，该抑制剂的稳定性能保持12个月。

以医院镜检部门为例，其对活体组织的检验通常采用微阵列检测(即蛋白或组织芯片)，这就要求活体组织细胞经常规方法裂解后，还必须要经过测定和校正裂解液中的蛋白质浓度后，才能进行相应的蛋白磷酸化水平检测。因此受到多种因素的影响(如：裂解液制备时间过长，磷酸酶抑制也会不稳定)，使得磷酸酶抑制剂的抑制效果下降，导致样品中蛋白质的磷酸化状态发生改变，并进而影响检测结果。还有检测方法借助荧光技术直接作用于被检测组织上，但其受细胞膜的阻碍作用，抗体效果会受表达不稳定影响。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种保持蛋白磷酸化状态的组织细胞裂解液提取装置，尽可能地保护磷酸化状态并能使组织细胞尽快裂解的方法，以适应于医院活检组织镜检的需要，简化和统一被检的样本的制备，从而提高检测的通量、制备样本一致性和实时的准确性，来更好地评价生命现象.本装置能实现不具备特殊实验室条件的单位，如：医院镜检部门对活检组织的蛋白磷酸化检测的样本制备.

镜检指通过纤维镜进行的检测，纤维镜是一种可随意弯曲、细小、柔软的内腔镜，由导光性能良好的玻璃纤维制成，其外部有冷光源照明，能按操作要求进入成角度的生理或病理性小腔道内，观察微小的病变，采取组织或细胞样本。

在纤维气管镜或胃肠道镜检过程中，技术人员通常需要对活体器官进行取样，以便于通过进一步的组织检测分析病情。这些活体组织在离体后，其中某些蛋白质的磷酸化水平会发生变化，使得其与生理状态不相一致，比如：在离体状态下，JNK蛋白的磷酸化程度在逐渐增加，而ERK蛋白的磷酸化程度则在减少。因此，在离体的组织或细胞样本中需要加入磷酸酶抑制剂，减少活组织离体后某些蛋白磷酸化表达变化，保持活组织离体后蛋白磷酸化原有状态，以确保检测的结果与实际的生命状况相一致，能为生命现象和疾病的诊断提供依据。

在镜检的整个过程当中，实时的蛋白磷酸化状态是极其不稳定或易发生改变，不仅需要对离体样本的及时处理，还需要对处理后样品制备及快速地分析。因此，保持组织细胞的蛋白磷酸化状态的技术一直是很重要的。

活检组织源自于活体动物器官的细胞或形态相似、功能相同的细胞群及其细胞间质。活体动物包括人、野生动物和家畜(Livestock)。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而人工饲养的动物，如：狗、鼠、仓鼠、猪、兔、奶牛、水牛、公牛、绵羊、山羊、鹅和鸡等，活体动物器官的具体类型，但不仅限于，如：鼻、喉、食管、支气管、胃、十二指肠、胆道、结肠、膀胱或宫腔等。