[实用新型]爱泼斯坦-巴尔病毒衣壳抗原和胸苷激酶蛋白免疫球蛋白A抗体联合检测试纸

说明书

技术领域

本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测爱泼斯坦-巴尔EB病毒衣壳抗原VCA和胸苷激酶TK蛋白免疫球蛋白AIgA抗体联合快速检测试纸。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)是一种感染人类并引起重要疾病的DNA病毒。流行病学、血清学和分子生物学资料证实，与EBV感染有关的疾病很多，特别是与鼻咽癌nasopharyngeal carcinoma，NPC的发生有密切关系。1997年世界卫生组织的国际抗癌联盟年会上把EBV归类为第一类致癌物。血清EB病毒-衣壳抗原-免疫球蛋白AEBV-VCA-IgA，EB病毒-早期抗原-免疫球蛋白A(EBV-EA-IgA)检测目前已用于NPC的临床辅助诊断。衣壳抗原-免疫球蛋白AVCA-IgA检测通常用于筛查以排除NPC的诊断，灵敏度高于90％，但有报道表明其特异性有时会低于70％；相反，早期抗原-免疫球蛋白A EA-IgA检测目前被用于鼻咽癌的确定性检测，特异性高于90％而灵敏度低于80％，两者在鼻咽癌可疑病例诊断时有互补作用。对于鼻咽癌疑似病人，VCA-IgA其阴性预测率达98％，可作为排除鼻咽癌的指标，仅有低于10％的假阴性率；VCA-IgA阳性结果由于有时会产生高达30％的假阳性率，故检测阳性不作为的NPC阳性确认结果。

TK蛋白是EB病毒在DNA的合成调控中起重要作用的蛋白。Connolly等[Conolly Y，Littler E，Sun N，et al.Antibodies to Epstein Barr virus thymidinekinase：a characteristic marker for the serological detection of nasopharyngealcarcinoma[J].Int.JCancer，2001，15：692-697]用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人体血清中针对EB病毒TK蛋白的IgA抗体，证实此抗体是一个良好的鼻咽癌标志物，与EBV-VCA-IgA相比，具有较高的检测灵敏度和更高的特异性。近年来陆续也有相关报道支持这一观点。因而将TK-IgA用于临床辅助诊断应该会进一步提高鼻咽癌诊断的可靠性。以上所有的报道基本采用ELISA方法对IgA进行检测，没有用免疫层析胶体金技术检测EBV-VCA-IgA和EB病毒-胸苷激酶-免疫球蛋白AEBV-TK-IgA的报道，特别是制备成同一种试剂进行快速联合检测。运用免疫层析胶体金技术，研制新型的EB病毒抗体诊断试剂，将为鼻咽癌的诊断提供更多更好的方法。

运用免疫层析胶体金技术诊断时，标记鼠抗人IgA抗体，包被VCA和TK抗原，检测时在上样垫上加入50-100ul被检样品，样品中的IgA将和标记的鼠抗人IgA结合形成复合物，样品中若含有抗VCA或抗TK-IgA抗体，亦同样形成复合物，在样品的带动下扩散到NC膜上进一步层析，当遇到包被在NC膜上T线处VCA或TK抗原时，抗VCA或TK-IgA-胶体金复合物将和T线上的抗体结合，被捕获在包被处，当被捕获的胶体金复合物达到一定数量时，则形成肉眼可见的T线；若血清中不含特异性抗体IgA抗体，则不能形成免疫复合物，亦不能形成T线，C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性样品检测时均会出现。根据C、T线的有无直接用肉眼判定结果，操作简单，整个反应在20分钟内完成。

发明内容

本发明的目的是提供一种爱泼斯坦-巴尔EB病毒衣壳抗原VCA和胸苷激酶TK蛋白免疫球蛋白AIgA抗体联合快速检测试纸，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。

本发明提供一种爱泼斯坦-巴尔病毒衣壳抗原和胸苷激酶蛋白免疫球蛋白A抗体联合检测试纸，其特征是在塑料支撑板8一端上设置上样垫1，在上样垫1一端连接标记有鼠抗人IgA抗体的胶体金垫2，在胶体金垫2一端连接硝酸纤维素膜3，在硝酸纤维素膜3的另一端连接吸样垫4，硝酸纤维素膜3包被有相互分离的检测线5、6和质控线7，检测线5、6为分开包被重组表达的EB病毒VCA和TK蛋白抗原或抗原片段，质控线7为包被在NC膜上的抗鼠免疫球蛋白GIgG构成。

所述的爱泼斯坦-巴尔病毒衣壳抗原和胸苷激酶蛋白免疫球蛋白A抗体联合检测试纸，其特征在于所述的上样垫1为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫4由吸水滤纸，所述的抗鼠免疫球蛋白GIgG，是羊抗鼠或兔抗IgG构成。