[实用新型]一种A型肉毒毒素检测试纸条

说明书

技术领域

本实用新型属于生物检测领域，具体涉及一种A型肉毒毒素检测试纸条。

背景技术

肉毒毒素(Botulinum neurotoxin，BoNT)是由厌氧的肉毒梭菌(Clostridium botulinum)产生的一种毒性极强的蛋白类毒素，其中A、B、E型肉毒毒素可引起人类肉毒中毒，我国报道由肉毒毒素致病者大多数为A型。各型肉毒毒素分子量均约150000D；由二硫键链接重链和轻链组成，包括一条重链(H，约100kD)和一条轻链(L，约50kD)，H链包含了N-末端(约50kD)和C-末端(约50kD)，轻链通过二硫键与重链的N-末端连接。其中A型肉毒毒素的研究最为深入，其应用也最为广泛。从对A型毒素的研究来推断，肉毒毒素分子是一种酸性蛋白质，各型毒素的等电点(pI)在5.3～6.1之间。肉毒毒素是已知毒素中毒力最强(天然物质中最强)的神经麻痹毒素，比氰化钾毒力大1万倍，其小鼠LD50介于0.1～1ng/kg体重，少至0.1～1μg的毒素就可导致成人中毒死亡，纯化的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠。BoNT可以经消化道摄入、呼吸道吸入、伤口或眼睛等吸收而导致人类肉毒中毒。此外，该毒素被一些国际恐怖和极端组织利用来制造恐慌。自恐怖袭击事件后，美英等西方国家便把BoNT列为最有可能被使用的生物恐怖剂之一。因此，了解和认识BoNT检测方法对于及早采取应对措施具有十分重要的医学和军事意义。

现阶段检测方法则根据肉毒毒素所具有的理化特性、生化特性和免疫原性发展出的多种检测法，其中以免疫检测法为主。免疫检测法大多是依赖于抗原抗体反应的免疫学方法，包括多克隆和/或单克隆为基础的放射免疫法或酶联免疫吸附法(ELISA)，免疫层析试验和电化学发光生物传感器等。尽管免疫检测法发展迅速，但经典的小鼠致死试验仍是检测肉毒毒素的金标准。

目前肉毒毒素中毒的实验室检验，检出污染物中存在肉毒毒素并鉴定出毒素型别是确定肉毒中毒的关键。肉毒毒素检测的金标准是经典的小鼠致死试验，其检出极限可达10-20pg，但该实验也存在许多缺点，主要表现在耗时长、工作量大、需要大量实验动物等。国内外许多实验室都曾在血清学检测方法上做过大量研究，如酶联免疫分析(ELISA)、放射免疫分析、肽链内切酶联免疫检测等，这些方法在克服耗时性、需要特殊设备以及检验灵敏度和特异性矛盾等方面存在或多或少的缺陷，从而限制了这些方法的推广应用，至今还没有哪种方法能真正替代经典的动物实验。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种方便、快捷地检测A型肉毒毒素的抗原试纸。该试纸的工作原理是利用特异性抗原-抗体的结合，用胶体金标记抗体，与待检抗原结合后，使与试纸结合的捕获抗体显色。

本实用新型试纸在检测A型肉毒毒素的同时，可利用金标免疫分析仪进行的半定量检测方法。

本实用新型一种方便、快捷地检测A型肉毒毒素的检测试纸，它包含：

(1)反应支持物；

(2)吸水垫；

(3)硝酸纤维膜，该膜包被有A型肉毒毒素的多克隆抗体条带和质控羊抗兔IgG的条带；

(4)金标抗体保护膜，其中含有胶体金标记的A型肉毒毒素单克隆抗体。

本实用新型涉及的上述A型肉毒毒素的检测试纸，它还包含样品垫，该样品垫的材料选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。

本实用新型涉及的上述A型肉毒毒素的检测试纸，其中反应支持物选用PVC板。

本实用新型涉及的上述A型肉毒毒素的检测试纸，其中吸水垫选用滤油纸。

本实用新型涉及的上述A型肉毒毒素的检测试纸，其中金标抗体保护膜的材料选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维，其上均匀涂布有胶体金标记的A型肉毒毒素单克隆抗体。

另一方面，本实用新型涉及的上述A型肉毒毒素的检测试纸，其中，吸水垫、硝酸纤维膜、金标抗体保护膜、样品垫和反应支持物按照附图1所示方式构成；反应支持物5位于底层，硝酸纤维膜2位于反应支持物5上的中部，该膜的T处是A型肉毒毒素单克隆抗体包被的检测条带，并且C处是羊抗兔IgG包被的质控条带；金标抗体保护膜3位于硝酸纤维膜上部的一侧并与之部分重叠，该膜含有胶体金标记的A型肉毒毒素单克隆抗体；吸水垫1位于硝酸纤维膜2上部的相对于金标抗体保护膜3而言的另一侧并与2部分重叠；样品垫4位于2上与1相反的一侧并与3部分重叠。

又一方面，本实用新型涉及的上述A型肉毒毒素的检测试纸，以吸水垫一侧为起始端，样品垫一侧为末端，A型肉毒毒素单克隆抗体的检测条带位于接近末端，羊抗兔IgG包被的质控条带接近于起始端。