[实用新型]一种金葡菌肠毒素B型胶体金检测试纸

说明书

技术领域

本实用新型属于生物检测领域，具体涉及一种金葡菌肠毒素B型(SEB)的检测试纸及其制备方法和在金葡菌肠毒素B型(SEB)中的应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(金葡菌)是引起感染和中毒性疾病的主要病原菌，其致病性主要与其产生多种致病物质有关，金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B，SEB)是其中一种重要的致病物质。目前测定金葡菌肠毒素B型的方法有ELISA法，需要借助梅标仪在实验室完成，不适合现场检测(李琦，陈立杰，董邦权等，双抗体夹心ELISA检测SEB方法的建立及在不同基质中检测的应用[J]细胞与分子免疫学杂志，1007-8738(2007)08-0761-02)；动物毒理实验，操作繁琐，检测时间长，需要丰富的经验及指定的实验环境，不适合现场检测。(最好有一些相关文献)(张靖，张军，应天翼等，应用SELDI-TOF-MS技术分析SEB染毒小鼠血清蛋白质组学变化【J】世界华人消化杂志，2006年4月18日(11)：1111-1114)。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种方便、快捷地检测金葡菌肠毒素B型(SEB)的试纸，同时可利用金标免疫分析仪进行的半定量检测方法。该试纸的工作原理是利用特异性抗原-抗体的结合，用胶体金标记抗体，与待检抗原结合后，使与试纸上结合的捕获抗体显色。本实用新型还涉及制备上述检测试纸的制备方法。

本实用新型能够基于一份标本和一个试纸，快速方便地检测出标本中的金葡菌肠毒素B型(SEB)，节省了大量人力物力，方便、快速、简捷。

本实用新型涉及一种方便、快捷地检测金葡菌肠毒素B型(SEB)的检测试纸，它包含：

(1)反应支持物；

(2)吸水垫；

(3)硝酸纤维膜，该膜包被有SEB抗体(例如兔抗SEB多克隆抗体，或SEB鼠源单抗)的检测条带和质控条带(例如羊抗兔的IgG)；

(4)金标抗体吸附膜，其中含有胶体金标记的兔抗SEB。

本实用新型涉及的上述金葡菌肠毒素B型的检测试纸，它还包含样品垫。

本实用新型涉及的上述金葡菌肠毒素B型的检测试纸，其中反应支持物选用PVC板。

本实用新型涉及的上述金葡菌肠毒素B型的检测试纸，其中吸水垫选用滤纸。

本实用新型涉及的上述金葡菌肠毒素B型的检测试纸，其中金标抗体吸附膜选用聚酯膜、玻璃纤维或滤纸纤维。

另一方面，本实用新型涉及的上述金葡菌肠毒素B型的检测试纸，其中吸水垫、硝酸纤维膜、金标抗体吸附膜、样品垫和反应支持物按照附图1所示方式构成；反应支持物5位于底层，硝酸纤维膜2位于反应支持物5上的中部，该膜的T处是兔抗SEB多克隆抗体包被的检测条带，并且C处是羊抗兔IgG包被的质控条带；金标抗体吸附膜3位于硝酸纤维膜上部的一侧并与之部分重叠，该膜含有胶体金标记的兔抗SEB多克隆抗体；吸水垫1位于硝酸纤维膜2上部的相对于金标抗体吸附膜3而言的另一侧并与硝酸纤维膜2部分重叠；样品垫4位于硝酸纤维膜2上与吸水垫1相反的一侧并与金标抗体吸附膜3部分重叠。

又一方面，本实用新型涉及的上述金葡菌肠毒素B型的检测试纸，以吸水垫一侧为起始端，样品垫一侧为末端，兔抗SEB多克隆抗体的检测条带位于接近末端，羊抗兔IgG包被的质控条带接近于起始端。

本实用新型再一个目的是提供制备所述检测金葡菌肠毒素B型的试纸的方法，该方法包括以下步骤：胶体金探针的制备，金标抗体吸附膜的制备，硝酸纤维膜的喷涂包被。

1、胶体金探针的制备

(1)将HAuCl₄先配制为0.01％水溶液。磁力搅拌下准确加入1ml 1％的HAuCl₄，同时加入1.5-3ml 1％的柠檬酸三钠水溶液。颜色稳定后继续加热，冷却至室温后加纯水补足至100ml，4℃避光保存。

(2)用K₂CO₃调PH值为约7-9，优选为约7.8-8.9，更优选约8.2-8.5。

(3)将胶体金调至pH 8.2-8.5，，用5mM PB(pH 7.2)稀释抗体至0.2mg/ml。

(4)保持胶体金稳定。

本实用新型还在于提供一种获得维持胶体金稳定的抗体最佳标记剂量的方法，该方法包括：

a.取10支洁净的1.5ml离心管，分别加入胶体金溶液1ml。