[实用新型]人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及诊断试剂应用设备领域，尤其涉及一种用于检测人白蛋白的试剂盒。

背景技术

人血清白蛋白是衡量肝脏功能和机体营养状况的重要指标。目前，用于检测白蛋白的方法主要有溴甲酚紫(BCP)法、蛋白电泳法和溴甲酚绿(BCG)法，其中BCP与BCG法需利用全自动生化分析仪，其操作简便、快速，但全自动生化分析仪价格昂贵，一次性投资大，且灵敏度不高，对于极微量白蛋白的检测准确度不高；蛋白电泳法操作繁琐，且因白蛋白与丽春红S染料结合力偏低，常导致结果偏低，目前已经不常被采用。因此，有必要选用一种经济、灵敏度和准确度高的方法来进行白蛋白，特别是极微量白蛋白的检测。

酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，可敏感地检测体液中微量的特异性蛋白。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题是提供一种人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒，其操作简便，成本低，稳定性好，适合于血液及尿液中白蛋白检测，特别是尿液中极微量白蛋白检测。

为解决上述技术问题，本实用新型的技术方案是：一种用于ELISA法检测人白蛋白的试剂盒，包括盒盖、盒体和酶标板，其中酶标板又包括固相载体和包被层，固相载体为设置有多个微孔的微孔板，包被层附着在固相载体的微孔表面，包被层是由小鼠抗人白蛋白单克隆抗体和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。

优选的，所述固相载体为96孔聚苯乙烯试剂板(PS)。

优选的，所述固相载体为48孔聚苯乙烯试剂板(PS)。

经实验表明，使用本实用新型在检测人血清及尿液标本时其最低检测限为0.15ng/ml，而传统的全自动生化BCP或BCG法则为1ug/ml，极大地提高了灵敏度；同时其回收率为87±15％，重复性亦佳，因此特别适用于尿液微量白蛋白检测，对于肝、肾损伤及代谢性疾病的发生、发展的监控具有重要的临床价值；另外，本实用新型不需投资大型自动生化分析仪，操作方法简单，经济、快捷、成本低。

附图说明

图1为本实用新型试剂盒结构示意图；

图2为本实用新型酶标板结构示意图；

图3为本实用新型酶标板剖视图。

盒盖4，酶标板5，盒体6，固相载体1，固相载体1上的微孔2，包被层3。

具体实施方式

如图1所示，本实用新型试剂盒由盒盖4，酶标板5和盒体6组成。

如图2和图3所示，酶标板5由固相载体1和包被层3组成，固相载体1上有微孔2，包被层3附着在微孔2上。

本实用新型的制备方法可以是：采用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)作为固相载体，先将其置于紫外光下辐照2小时，使PS板活化。在试剂板微孔条上先包被一定浓度的小鼠抗人白蛋白单克隆抗体，4℃过夜，经洗板及牛血清白蛋白封闭处理后制成包被好的酶标板，以备标本检测。

本实用新型的使用方法是：依次以生物素化兔抗人白蛋白多克隆抗体，亲和素化辣根过氧化物酶(HRP)作为检测试剂A及B，以3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液，完成用于ELISA法检测人白蛋白的试剂盒的使用。

实施例1：应用人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒以及大型自动生化分析仪分别定量检测人定值(35.5ng/ml)尿液标本。

1、人极微量白蛋白ELISA检测试剂盒方法操作：①试剂盒平衡至室温。②加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品(Alb)或定值样品100ul，覆膜，37℃放置120分钟。标准品浓度分别为：40ng/ml，20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml。③弃去液体，甩干，每孔加检测试剂A工作液100ul，覆膜，37℃放置60分钟。④弃去孔内液体，洗板3次，甩干，温育60分钟。⑤每孔加检测液试剂B工作液100ul，覆膜，37℃放置60分钟。⑥弃去孔内液体，洗板5次，甩干。⑦每孔加TMB溶液90ul，37℃避光显色30分钟。⑧依序每孔加终止溶液50ul，用酶联仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。

2、大型自动生化分析仪检测同一上述尿液标本

按照仪器要求，上样，运行仪器，仪器自动打出结果。

3、结果：见表1