[实用新型]鸡肉风味相关基因ADSL SNP分型试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种鸡肉风味相关基因ADSL SNP分型试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

优质肉鸡育种中肉质性状的选育是关键环节，而肉质的风味是肉质性状的一个非常重要的指标。肌肉肌苷酸(IMP)含量是影响肉质风味的重要因素，而腺苷琥珀酸裂解酶(ADSL)是IMP合成过程中的关键酶之一，对于最终肌肉肌苷酸含量具有重要的影响。近几年的研究表明，ADSL基因(季从亮等，2004；束婧婷等，2007)是影响肉品质风味的主效基因或与主效基因相连锁的基因，可作为鸡肉风味物质选择的分子遗传标记。

连接酶检测反应(ligase detection reaction，LDR)LDR是利用高温连接酶实现对基因多态性位点的识别。通过多重PCR(Multiplex PCR)获得含有待检测突变位点的基因片段，高温连接酶一旦检测到DNA与互补的两条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基错配，则连接反应就不能进行，最后通过测序仪电泳读取检测结果。该技术具有特异性高、检测快速、通用性强、适用范围广、成本低廉等特点，目前已成功应用于人类疾病相关基因分子标记的SNP检测和基因诊断试剂盒的研发。

发明内容

本实用新型的目的是为了给鸡肉风味物质相关基因ADSL基因C3484T-SNP的检测提供一种准确性高、快速、价格低廉的基因分型试剂盒。

本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的，一种鸡肉风味相关基因ADSL SNP分型试剂盒，其特征是，所述的试剂盒由盒体、盒体内的隔离垫、隔离垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、LDR探针混合物L、DNA Tag酶和DNA连接酶组成。

其中P和L详细信息如下：

引物混合物P表示用于ADSL基因PCR扩增的上下游引物混合物，具体信息如下：

ADSL上游引物序列5’-CACTGCTGTCCCAAAGCTG-3’，

ADSL下游引物序列5’-GCAGGCAGGAAAATGAAAGT-3’。

探针混合物L表示用于ADSL基因LDR反应的三根探针的混合物，具体信息如下：

A探针ADSL_MODIFY序列：

5’P-GAAGTTGCTCCAAGGTGAATGATGGTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM 3’

B探针ADSL_C序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTACCGTGTTATCCCCTACGTAACAG-3’

C探针ADSL_T序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTACCGTGTTATCCCCTACGTAACAA-3’

本试剂盒使用方法：

1、PCR扩增SNP位点所在片段

1)PCR扩增反应体系准备

在200μl的PCR薄壁管中，加入1μl DNA模板(50ng/μl)、2μl10×Bufer、0.6μl Mg2+(100mmol/L)、2μl dNTP(20mmol/L)、0.2Tag酶E1(5U/μl)、0.4μl P15pmmol/μl、4μl 5×Q-solution、9.8μlddH₂O共20μL PCR反应体系，充分混匀后短暂离心，最后加入20μl石蜡油。

2)PCR扩增反应程序设置

在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上设置PCR扩增反应程序，程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。

3)反应结束后，取2μl反应产物在3.0％琼脂糖胶，0.5×TBE中电泳，检测反应是否成功。

4)剩余反应产物保存于-20℃。

2、PCR产物的连接酶检测反应

1)在PCR扩增产物中加入等体积ddH₂O稀释，作为连接反应的模板。

2)在200μl的PCR薄壁管中，加入1μl 10×Buffer、1μl PCR产物、1μl L1、0.05μl DNA连接酶40U/μl、6.95μl ddH₂O，10μL连接酶检测反应体系，充分混匀后短暂离心，最后加入10μl石蜡油。

3)在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上连接酶检测反应程序，程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行连接反应。