[实用新型]H1N1病毒核酸高效提取试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种从生物样品中分离核酸的试剂盒，尤其是从无细胞生物样品中快速纯化H1N1病毒核酸的试剂盒。 

背景技术

流行性感冒是一种常见的呼吸道传染病，引起该病的流感病毒抗原性复杂，根据其核心蛋白抗原性不同分为甲、乙、丙三型，根据其表面抗原血凝素(H)和神经氨酸酶(N)的不同，同型病毒又分为若干亚型，各型之间无交叉免疫。甲型H1N1流感病毒已在世界范围内传播，且感染人数急剧增多，给人类带来巨大灾害。 

从生物材料中高效、简便地分离纯化得到完整、高纯度的流感病毒核酸是研究流感疾病的基础。传统的核酸纯化方法步骤繁琐，耗时长，提取效率低，已经很难满足高通量的实验需求。同时传统方法使用酚/氯仿等试剂对人体产生巨大毒害作用且污染环境。磁珠在外加磁场的作用下可快速地分离核酸，简单、快捷、成本低廉且安全。 

目前已有很多公司生产出专门为核酸磁性分离纯化而设计的配套自动化系统，这些仪器使得磁珠法纯化核酸实现了自动化，极大地提高了样品处理的通量，易于高通量的筛选，同时也提高了提取操作的可重复性。 

本实用新型具有灵敏度高、成本低廉、操作简便快捷、省时省力等特点，可用于自动化核酸提取仪器。 

发明内容

针对上述情况，本实用新型的目的在于提供一种能够从无细胞生物样本中快速高效分离H1N1病毒核酸的试剂盒，并且适用于自动化核酸提取仪器。该试剂盒操作简便，成本低廉，灵敏度高，所提取的病毒核酸可直接用于后续实验。 

本实用新型提供了一种通过磁性颗粒来纯化H1N1病毒核酸的试剂盒，该试剂盒有一个盒体，盒体内包括磁力架以及多个小瓶，所述多个小瓶中分别装有裂解缓冲液、结合缓冲液、洗涤缓冲液Ⅰ、洗涤缓冲液Ⅱ、洗涤缓冲液Ⅲ、洗脱缓冲液、蛋白酶K、磁珠溶液、助沉剂。 

在含病毒的样品中加入蛋白酶K、助沉剂及裂解缓冲液，使病毒裂解释放核酸；加入结合缓冲液和磁珠，样品中的核酸与磁珠结合，然后在外加磁场条件下进行分离，收集磁珠-核酸复合物；加入洗涤缓冲液，去除未结合物质；加入洗脱缓冲液，将结合在磁珠上的核 酸洗脱下来，回收洗脱液即为病毒核酸。其中助沉剂有助于提取病毒含量低的样本，提高了试剂盒灵敏度。 

本实用新型的有益效果是：提供了一种高效的病毒核酸的试剂盒，该试剂盒成本低廉、操作简便，灵敏度高，可配合自动化仪器，快速高通量提取病毒核酸。所提取的核酸可直接用于后续实验研究。 

附图说明

图1为本实用新型的立体结构图。 

图2为病毒含量与Ct值的相关性曲线。 

具体实施方式

下面结合具体实施例对本实用新型进行详细的说明。 

本实用新型提供了一种通过磁性颗粒来纯化病毒核酸的试剂盒，该试剂盒有一个盒体11，盒体11内包括：裂解缓冲液1、结合缓冲液2、洗涤缓冲液Ⅰ3、洗涤缓冲液Ⅱ4、洗涤缓冲液Ⅲ5、洗脱缓冲液6、蛋白酶K 7、磁珠溶液8、助沉剂9及磁力架10，上述液体试剂均分装于小瓶内。 

使用时，按照以下具体步骤操作： 

取H1N1甲型流感病毒阳性标本的培养病毒(4×10⁶copies/ml)，进行10倍梯度稀释，然后用本试剂盒提取病毒RNA，同时用Roche High Pure Viral RNA Kit作为对照。 

(1)向1.5ml去RNA酶离心管中加入5μl蛋白酶K，2μl助沉剂和100μl裂解缓冲液，加入100μl病毒稀释液，充分混匀，55℃水浴10分钟。 

(2)向离心管内先加入300μl结合缓冲液，再加入20μl磁珠(使用前充分混匀)，室温下柔和充分混匀10分钟。 

(3)将离心管置于磁力架上1分钟，使管内磁珠吸附到一边，用加样枪移走管内液体，取下离心管。 

(4)向离心管内加入250μl洗涤缓冲液Ⅰ，使磁珠重新悬浮，利用磁力架吸附磁珠，1分钟后移走管内液体，取下离心管。 

(5)向离心管内加入250μl洗涤缓冲液Ⅱ，使磁珠重新悬浮，利用磁力架吸附磁珠，1分钟后移走管内液体，保持离心管置于磁力架上，使磁珠继续被吸附。 

(6)从离心管的另一侧缓慢加入275μl洗涤缓冲液Ⅲ，尽量不要冲起磁珠，1分钟后移走管内液体，取下离心管。 

(7)向离心管内加入50μl洗脱缓冲液，使磁珠重新悬浮，55℃水浴5分钟，其间轻轻晃 动使RNA洗脱出来。 

(8)将离心管置于磁力架1分钟，使磁珠被吸附，将洗脱液转移至干净的离心管，即为纯化的RNA。