[发明专利]反应治具和反应方法、以及cDNA的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及反应治具(反応治具reaction jig(反应保持器))和反应方法。更具体而言，本发明涉及可平行且简便地实施任意包含清洗工序的多个连续反应的反应治具和反应方法。此外，本发明还涉及使用上述反应治具的cDNA的合成方法。

背景技术

通常由mRNA起始的cDNA的合成和DNA的扩增等基因相关反应多以小容量平行进行多个种类。此时，通常例如使用96孔或384孔等微孔列阵(マイクロウエルアレイmicrowell array)，准备已将反应液和清洗液加入到各孔中的阵列，一旦反应或清洗结束，则通过移液管将溶液移动到下一个孔中，供下一步处理使用。当上述处理操作通过程序进行时也可利用机器人。

但是，即使利用机器人，移动溶液所使用的移液管也需要每次清洗或更换后在下一步处理中使用，操作非常繁杂。

为代替使用移液管，也可使用磁珠，用磁石吊起固定于磁珠上的供试品并使之移动(例如日本特表2007-504835号公报(专利文献1))。但是，当使用上述微孔列阵时，移动所使用的磁石需要从孔的上方靠近，并根据情况浸渍于孔中的溶液中。浸渍于溶液中的磁石在下一步骤前需要清洗。另外，在移动至下一步骤后，为了将磁珠从磁石上释放，也需要磁石可消磁。

非专利文献1中刊登了利用磁珠的RT-PCR反应法。在该文献所记载的方法中，室温下的反应通过相对于100份溶液添加1份油，通过油膜覆盖液滴来进行蒸发等的预防。

专利文献1：日本特表2007-504835号公报

非专利文献1：Juergen Pipper1，Masafumi Inoue2，Lisa F-P Ng3，PaveL NeuziL 1，4，Yi Zhang 1，4&Lukas Novak 1，4，NATURE MEDICINE VOLUME 13 NUMBER 10 OCTOBER 2007第1259-1263页

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，当使用96孔或384孔等微孔列阵平行进行多种反应和清洗操作时，无论使用移液管，还是使用磁珠，都需要清洗或更换操作所使用的移液管或磁珠，操作繁杂。

此外，如非专利文献1所记载的方法所示，通过油膜覆盖液滴来防止蒸发等，就操作而言也是繁杂的。特别是当使用大量液滴时，这种繁杂无法忽视。

因此，本发明的目的在于提供每次操作不需要清洗或更换移动溶液等所使用的器具，可平行进行多种反应和清洗操作的装置和方法。此外，本发明的目的还在于提供不通过油膜覆盖液滴而可以平行进行多种反应和清洗操作的装置和方法。

解决课题的手段

本发明如下所示。

(1)反应治具，其特征在于：基板一侧的表面排列设置有多个突起状围壁，所述突起状围壁至少具有1个凹口部，且在内部具有可保持液滴的空间，并且

所述基板表面的至少保持所述液滴的面对于纯水的接触角为90～150°的范围。

(2)(1)中记载的反应治具，其中，所述多个突起状围壁至少部分或全部纵横地排列设置。

(3)(1)或(2)中记载的反应治具，其中，所述突起状围壁的液滴保持用空间可保持0.5μl～200μl范围的量的液滴。

(4)(1)～(3)中任1项记载的反应治具，其中，突起状围壁具有2个或3个凹口部，所述凹口部开口的间隔为0.5～10mm的范围。

(5)(1)～(4)中任1项记载的反应治具，其中，所述基板表面由石蜡树脂(パラフイン樹脂)、特氟隆树脂或有机硅树脂构成。

(6)(1)～(4)中任1项记载的反应治具，其中，所述基板具有由石蜡树脂、特氟隆树脂或有机硅树脂构成的涂层。

(7)(1)～(6)中任1项记载的反应治具，其中，使用所述反应治具以在各突起状围壁的液滴保持用空间中，将相同或不同种类溶液的液滴不与置于其它突起状围壁的液滴保持用空间部分的液滴混合地保持。

(8)(1)～(7)中任1项记载的反应治具，其中，使用所述反应治具以在属于同一横列的突起状围壁的液滴保持用空间中保持同一种类溶液的液滴。

(9)(7)或(8)中任1项记载的反应治具，其中，所述溶液为含有表面张力降低试剂的反应液或清洗液。

(10)(1)～(9)中任1项记载的反应治具，所述反应治具进一步具有覆盖具有所述突起状围壁的表面的覆盖部件，且进一步具有为所述覆盖部件所覆盖的空间提供湿气的保湿部件。