[发明专利]用于增强免疫应答的泰帕森(Tapasin)增加

说明书

背景技术

MHC I类抗原呈递途径对于通过向CD8⁺T细胞交叉呈递肿瘤抗原来引发抗肿瘤免疫应答、和通过肿瘤特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)来识别并杀灭肿瘤细胞二者具有重要意义。这两个过程中的一个重要组份是伴侣蛋白泰帕森(Tpn)，其为48kDa的I型膜糖蛋白，其功能是帮助将抗原性肽载运至内质网(ER)中的I类分子上。Tpn介导此功能的机制包括在ER中保留空MHC I类分子直至载入肽，稳定与抗原处理蛋白(TAP)有关的转运蛋白，将MHC I类抗原桥接至TAP，和支持亲和性肽与MHC I类抗原的结合。在Tpn存在下，表面MHC I类分子更稳定，并且因而可更有效地向CTL或其前体呈递抗原。Tpn表达缺陷导致包括TAP1和TAP2在内的MHC I类载运复合体不稳定，并且降低MHC分子在细胞表面上的表达。

已知在许多人类癌症(例如乳癌、黑素瘤、结直肠癌、和小细胞肺癌与非小细胞肺癌二者)以及小鼠癌症(例如小鼠纤维肉瘤和小鼠黑素瘤)中，Tpn下调。值得注意的是，在人类结直肠癌中，Tpn的丧失频率大于TAP 1、潜在膜蛋白2(LMP2)和潜在膜蛋白7(LMP7)，表明Tpn的丧失可能是这些肿瘤克服免疫监督的关键事件。此外，在多种人类癌症中，MHC I类抗原呈递途径中包括Tpn在内的组份的下调或缺少导致肿瘤的免疫原性降低并且与疾病进展和疾病结果有关。源自C57BL/6小鼠自发性肺癌的小鼠肺癌细胞系CMT.64的特征在于抗原呈递途径中许多组份下调，包括MHC I类重链、β₂-微球蛋白、LMP2和LMP7、TAP1和TAP2、以及Tpn。已有多个研究证实，在CMT.64和其它肿瘤细胞中使用复制性疫苗病毒或非复制性腺病毒恢复TAP-1表达可提高肿瘤抗原特异性免疫应答并延长动物存活。

因此，本发明的目标是确定自非复制性腺病毒表达的人类Tpn(hTpn)在单独使用或与人类TAP1(hTAP1)组合时是否可恢复抗原呈递、增强肿瘤抗原特异性免疫应答、并延长荷瘤哺乳动物的存活。

发明内容

本发明涉及在Tpn缺陷型癌细胞中表达Tpn，以恢复功能性表面MHC I类抗原复合体的表达，增强肿瘤细胞的免疫原性并促进具有这些转移性肿瘤的动物的长期存活。已显示Tpn在Tpn缺陷型小鼠肝细胞瘤细胞系H6癌细胞系和人类HepG2细胞系中的表达可提高表面MHC I类的表达，从而表明此方法可有效治疗多种癌症。此处所表现的结果表明，因活体内AdhTpn感染而增强的MHC I类表面表达和免疫原性可显著阻碍CMT.64肿瘤生长并延长动物存活。人们相信，集中在肿瘤位点的AdhTpn注射可感染CMT.64细胞并增强内源性抗原呈递途径的活性，从而导致在表面表达MHC I类限制性肿瘤抗原，其随后可由数量增加的肿瘤浸润性CD8⁺T细胞在CD4⁺T细胞和CD11c⁺树突细胞(DC)的辅助下识别。

尽管在CMT.64细胞中存在多种APC缺陷(包括MHC I类重链、β₂-微球蛋白、TAP1、TAP2、LMP2、和LMP7的下调)，但仍发生表面MHC I类表达的恢复和肿瘤细胞免疫原性增强。肽向ER中的残余转运可能是因低水平的TAP表达(通过蛋白质印迹法(Western blot)检测不到)所致，其在Tpn介导的伴侣蛋白活性存在下提供足量MHC I类肽复合体，从而显著提高对特异性效应T细胞杀灭的易感性。已显示可通过Tpn来稳定抗原呈递途径中包括TAP在内的其它组份的稳态水平。因此，Tpn在CMT.64细胞中的表达可稳定这些细胞中存在的低水平的TAP，并且由此以这种方式显著提高H-2K^b和H-2D^b的表面表达和CMT.64细胞的免疫原性。在治疗癌症(其缺乏AdhTAP1与AdhTpn)时组合这两种组份可增强对荷瘤动物的保护并延长其存活。