[发明专利]凝集性酵母及其制备方法

权利要求书

1.具有凝集性和耐热性的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)转化株的制备方法，其特征在于，依次含有下述工序(A)～(C)：

(A)在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的内源性FLO基因的上游导入标记基因序列和表达启动子序列来制备酿酒酵母转化株的工序；

(B)由染色体DNA得到含有标记基因序列、表达启动子序列、和FLO基因序列的DNA片段的工序，所述染色体DNA源于工序(A)中制备的酿酒酵母转化株；

(C)将工序(B)中得到的DNA片段作为FLO基因表达盒导入马克斯克鲁维酵母，制备马克斯克鲁维酵母转化株的工序。

2.根据权利要求1所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，酿酒酵母的内源性FLO基因是选自FLO1基因、FLO5基因、FLO9基因、和FLO10基因中的1种以上的FLO基因。

3.根据权利要求1或2所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，标记基因为营养缺陷型标记基因。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，营养缺陷型标记基因是组氨酸、亮氨酸、尿嘧啶、蛋氨酸、赖氨酸、腺嘌呤、色氨酸、精氨酸的至少1种的营养缺陷型基因。

5.根据权利要求4所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，营养缺陷型标记基因是URA3基因。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的制备方法，其特征在于，马克斯克鲁维酵母是在组氨酸、亮氨酸、尿嘧啶、蛋氨酸、赖氨酸、腺嘌呤、色氨酸、精氨酸的至少1种的营养缺陷型基因中具有突变的马克斯克鲁维酵母突变体。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，表达启动子是3-磷酸甘油醛脱氢酶(TDH3)启动子。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，将线状的DNA片段作为FLO基因表达盒导入马克斯克鲁维酵母。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的马克斯克鲁维酵母转化株的制备方法，其特征在于，马克斯克鲁维酵母转化株是RAK4299株(NITEBP-514)、RAK4300株(NITE BP-515)、RAK4301株(NITE BP-516)、或者RAK4302株(NITE BP-517)。

10.由权利要求1～8中任一项所述的制备方法制备的、具有凝集性和耐热性的马克斯克鲁维酵母转化株。

11.根据权利要求10所述的马克斯克鲁维酵母转化株，其特征在于，其是RAK4299株(NITE BP-514)、RAK4300株(NITE BP-515)、RAK4301株(NITE BP-516)、或者RAK4302株(NITE BP-517)。