[发明专利]猿猴腺病毒SADV-36、-42.1、-42.2和-44及其应用

说明书

关于联邦资助研发的声明

本项工作部分受到国立卫生研究院的基金，NIH基金号P30-DK47757的支持。美国政府对本发明享有一定权利。

磁盘提交的资料通过引用纳入

申请人将以磁盘形式提供序列表通过引用纳入本文。这些磁盘以备份提供且仅包含计算机可读形式的“序列表”。这些磁盘分别标有“拷贝1”和“拷贝2”。这些磁盘内的文件名为“UPN-U4707PCT sequence listing.txt”。

发明背景

腺病毒是双链DNA病毒，基因组大小约为36千碱基(kb)，由于能在多种靶组织中实现高效基因转移以及较大的转基因容量，它被广泛用于基因转移应用。通常，腺病毒的E1基因缺失，被取代为由所选启动子、感兴趣基因cDNA序列和聚A信号组成的转基因盒，从而产生复制缺陷型重组病毒。

腺病毒的形态特征是由三种主要蛋白和许多群体小蛋白VI、VIII、IX、IIIa和Iva2组成的二十面体衣壳，这三种主要蛋白是六邻体(II)、五邻体基质(III)和突结尾丝(knobbed fibre)(IV)[W.C.Russell，J.Gen Virol.，81：2573-3704(2000年11月)]。病毒基因组为线形双链DNA，末端蛋白共价连接于含有末端反向重复(ITR)的5’末端。病毒DNA与高碱性蛋白VII和小肽pX(之前称为mu)密切相连。另一种蛋白V与此DNA-蛋白复合物包装在一起，并通过蛋白VI提供与衣壳的结构连接。该病毒也含有病毒编码的蛋白酶，这种蛋白酶是加工某些结构蛋白以产生成熟的感染性病毒所必需的。

已经开发了一种对包括人、猿猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒在内的哺乳动物腺病毒家族进行分类的方法。这种分类方法的开发依据该家族内的腺病毒序列凝集红血细胞的能力不同。结果得到了六个亚组，现在称为亚组A、B、C、D、E和F。参见T.Shenk等，Adenoviridae：The Viruses and their Replication(腺病毒科：病毒及其复制)，第67章，选自FIELD′S VIROLOGY(菲尔德病毒学)，第6版，B.N Fields等编，(LR出版社(Lippincott Raven Publishers)，费城，1996)，第111-2112页。

已报道可使用重组腺病毒将异源分子递送至宿主细胞。参见美国专利6,083,716，它描述了两种黑猩猩腺病毒的基因组。猿猴腺病毒C5、C6和C7已经描述于美国专利7,247,472，它可用作疫苗载体。其他黑猩猩腺病毒描述于WO 2005/1071093，可用于制造腺病毒疫苗载体。

本领域需要能避免人群中已有的免疫力对所选腺病毒血清型影响的有效载体。

发明概述

本文提供了猿猴腺病毒36(SAdV-36)、猿猴腺病毒42.1(SAdV-42.1)、猿猴腺病毒42.2(SAdV-42.2)、猿猴腺病毒44(SAdV-44)的分离核酸序列和氨基酸序列，以及含有这些序列的载体。还提供了利用本发明载体和细胞的许多方法。

本文所述方法包括通过给予本发明所述载体将一种或多种所选异源基因递送到哺乳动物患者。用本文所述组合物进行疫苗接种能够呈递所选抗原从而引发保护性免疫反应。基于SAdV-36、SAdV-42.1、SAdV-42.2和SAdV-44的载体也可用于在体外制造异源基因产物。本文描述了这种基因产物以及它们在许多此类方面的应用。

下文将更加详细地描述本发明的这些和其它实施方式以及优点。

附图简述

图1说明了用C36CMV PI FluA NP(含有NP表达盒的重组SAdV-36病毒-参见实施例4))和AdH5-FluA NP(含有NP表达盒的重组HAdV-5病毒)接种后，CD8+T细胞在对流感核蛋白肽刺激起反应中的多种功能，如实施例5所述。显示了SAdV-36和HAdV-5的细胞因子+CD8+T细胞的百分比。在各棒中，上段反映了分泌IFN-γ，但不分泌IL2或TNFα的CD8+T细胞亚组。中段反映了分泌TNFα，但不分泌IL2的CD8+T细胞亚组。下段反映了分泌IFN-γ、IL2和TNFα的CD8+T细胞亚组。

发明详述