[发明专利]对于水稻CW型雄性不育细胞质的育性恢复基因及育性恢复方法

说明书

技术领域

本发明涉及恢复CW型细胞质雄性不育性水稻的育性的方法，识别育性恢复基因有无的方法等。高等植物中存在的细胞质雄性不育性(Cytoplasmic Male Sterility；以下亦称为【CMS】)的原因是由于线粒体基因的突变而有受精能力的花粉的形成被抑制，从而种子不育，已知在某些CMS中，由于核中编码的育性恢复基因(Rf)的作用而花粉育性恢复。

背景技术

第一代杂种育种法也被称为杂交品种育种法，由于组合持有亲本的优良性状，且可育种显示杂种优势的品种，因此在品种育成中利用。为了大量且经济地采种F₁种子，在水稻中杂交品种的种子生产中利用着利用了细胞质雄性不育性的三系法。所谓三系法是指，利用作为持有雄性不育系统的系统的不育系统、育性恢复系统，及作为核基因与不育系统相同，而不持有不育细胞质的系统的维持系统的方法。使用这些3系统，(i)可通过使不育系统与恢复系统的花粉交配来获得杂种种子，(ii)另一方面，可通过使不育系统与维持系统的花粉交配来维持不育系统。

在育成使用了三系法的杂交品种中，世界上使用着BT型雄性不育细胞质和WA型雄性不育细胞质，但本发明的CW型雄性不育细胞质由于不明育性恢复基因Rf17(非特許文献1)的具体结构及功能等，至今未被利用。但是，由于仅通过至今使用着的雄性不育细胞质，由于遗传资源有限，有品种灭绝的危险，因此期望开发出新雄性不育细胞质的利用。

以往，为了推定植物体中的Rf17基因座的基因型，有必要首先从进行了检验交配的交配种子育成植物体(F1)，接着自交F1植物，并研究其种子形成率在一定以上(例如90％以上)的个体的出现频度。无法进行使用了DNA标记物的基因型的判定。

非专利文献1：Sota Fujii and Kinya Toriyama(2005)Molecularmapping of the fertility restorer gene for ms-CW-type cytoplasmicmale sterility of rice.Theo r.Appl.Genet.111：696-701

发明内容

发明拟解决的技术课题

要想在三系法中利用CW型雄性不育细胞质，有必要在育种恢复系统的水稻的各过程中确认水稻持有Rf17基因，然后，在最终阶段在两条等位基因中持有Rf17基因。

从而，本发明的主要目的は，提供将Rf17基因座的基因型基于其具体碱基序列信息直接鉴定的技术，及，提供人为地制成育性恢复系统的技术等。

解决课题的技术方案

本发明人测定了SEQ ID NO：1所示的序列，其为含对于CW型雄性不育细胞质的育性恢复基因Rf17的碱基序列。接着，成功于通过抑制SEQ ID NO：2所示的基因的表达来恢复CW型细胞质雄性不育水稻的育性，从而完成了本发明。

即本发明涉及以下实施方式。

【实施方式1】恢复水稻育性的方法，其通过在CW型细胞质雄性不育性水稻中抑制或减少含SEQ ID NO：2所示的碱基序列的基因的表达来恢复水稻育性。

【实施方式2】实施方式1的方法，其通过将基因组片段导入CW型细胞质雄性不育性水稻来恢复育性，所述基因组片段：

●源于对于CW型细胞质雄性不育性的育性恢复系统的第4染色体，且

●含由SEQ ID NO：1所示的碱基序列中至少第1611～4835位的碱基序列构成的核酸。

【实施方式3】实施方式2的方法，其中所述基因组片段由SEQ IDNO：1所示的全碱基序列构成。

【实施方式4】实施方式1的方法，其通过使用RNA干扰法抑制SEQ ID NO：2的基因表达来恢复CW型细胞质雄性不育性水稻的育性。

【实施方式5】实施方式4的方法，其通过将载体导入CW型细胞质雄性不育性水稻来诱导RNA干扰，所述载体：

●含：

■由SEQ ID NO：2所示的碱基序列构成的基因或其3’非翻译区中100～500个连续碱基序列、及

■上述之互补序列，且

●表达能在细胞内诱导RNA干扰的双链RNA。

【实施方式6】实施方式5的方法，其使用载体，所述载体：

●含：

■SEQ ID NO：2所示的碱基序列中第638～815位的连续碱基序列、及

■上述之互补序列，且