[发明专利]改良哺乳动物表达载体及其用途

权利要求书

1.一种表达载体，其包括：

(a)衍生自EB病毒(EBV)的OriP复制起点；

(b)SV40复制起点；

(c)用于插入目的基因的插入位点；和

(d)编码抗体重或轻链恒定区的核酸序列，其与所述插入位点可操作地连接。

2.权利要求1的表达载体，其中所述目的基因是抗体重或轻链可变区。

3.权利要求2的表达载体，其中所述抗体重或轻链可变区选自鼠类、人源化、嵌合和人的。

4.权利要求2的表达载体，其中所述抗体重链可变区是选自阿达木单抗、ABT-325和ABT-874的抗体的重链可变区。

5.权利要求3的表达载体，其中所述抗体轻链可变区是选自阿达木单抗、ABT-325和ABT-874的抗体的轻链可变区。

6.权利要求1-5中任一项的表达载体，其中所述抗体重链恒定区是鼠类或人的。

7.权利要求1-5中任一项的表达载体，其中所述抗体重恒定区选自γ1，z，a；γ1，z，non-a；γ2，n+；γ2，n-；和γ4。

8.权利要求7的表达载体，其中所述γ1，z，non-a抗体重链恒定区进一步包括在所述重链恒定区的位置234处的丙氨酸突变。

9.权利要求8的表达载体，其进一步包括在所述抗体重链恒定区的位置235或237处的丙氨酸突变。

10.权利要求1-5中任一项的表达载体，其中所述抗体轻链恒定区是人κ同种型或人λ同种型。

11.权利要求1-5中任一项的表达载体，其中所述抗体重链恒定区是鼠类γ1同种型或鼠类γ2a同种型。

12.权利要求1-5中任一项的表达载体，其中所述抗体轻链恒定区是鼠类κ同种型。

13.权利要求1的表达载体，其中所述抗体重链恒定区是Fc结构域。

14.权利要求2-5和13中任一项的表达载体，其中所述重或轻链抗体可变区对于所述插入位点是5′。

15.权利要求1-5和13中任一项的表达载体，其进一步包括与所述插入位点可操作地连接的启动子，其中所述启动子是EF-1α启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子。

16.权利要求1-5和13中任一项的表达载体，其进一步包括可选标记。

17.权利要求16的表达载体，其中所述可选标记是氨苄青霉素抗性基因。

18.权利要求15的表达载体，其中所述CMV启动子包括与SEQ IDNO：1的核苷酸1-608至少80％等同的核酸序列。

19.权利要求15的表达载体，其中所述CMV启动子包括与SEQ IDNO：1的核苷酸1-608至少90％等同的核酸序列。

20.权利要求15的表达载体，其中所述CMV启动子包括与SEQ IDNO：1的核苷酸1-608至少95％等同的核酸序列。

21.权利要求15的表达载体，其中所述CMV启动子包括SEQ IDNO：1的核苷酸1-608。

22.权利要求15的表达载体，其中所述EF-1α启动子是人的。

23.权利要求15的表达载体，其中所述EF-1α启动子包括与SEQ IDNO：2的核苷酸76-1267至少80％等同的核酸序列。

24.权利要求15的表达载体，其中所述EF-1α启动子包括与SEQ IDNO：2的核苷酸76-1267至少90％等同的核酸序列。

25.权利要求15的表达载体，其中所述EF-1α启动子包括与SEQ IDNO：2的核苷酸76-1267至少95％等同的核酸序列。

26.权利要求15的表达载体，其中所述EF-1α启动子包括SEQ IDNO：2的核苷酸76-1267。

27.权利要求1-5和13中任一项的表达载体，其中所述OriP复制起点包括与SEQ ID NO：1的核苷酸1795-3545至少80％等同的核酸序列。