[发明专利]干细胞聚集体及制备和使用方法

说明书

相关申请

本申请要求2008年1月18日提交的申请号为6I/022,121的美国临时专利申请的优先权，所述临时申请以引用的方式纳入本文中。

技术领域

本发明涉及细胞聚集体的组合物以及制备和使用所述细胞聚集体的方法，其中所述聚集体包含不是胚胎干细胞但可分化为外胚层、内胚层和中胚层中至少两种细胞类型的细胞，例如干细胞。

背景技术

干细胞

干细胞的特征在于它们能够自我更新(细胞分裂但不分化)并且产生分化程度更高的后代。组织学上的典型干细胞是胚胎干(ES)细胞。ES细胞可无限自我更新。ES细胞源自胚泡的内细胞团或植入后胚胎的原始生殖细胞(胚胎生殖细胞或EG细胞)。ES和EG细胞源自小鼠、非人灵长类和人以及其他动物。当被引入到胚泡中时，ES细胞可对所有组织的形成起作用。ES细胞疗法的一个缺点是当移植到出生后的动物中时，ES和EG细胞产生畸胎瘤。

ES(和EG)细胞可通过用抗SSEAl(小鼠)和SSEA4(人)的抗体进行阳性染色而被识别。在分子水平上，ES和EG细胞表达若干对这些未分化细胞特异的转录因子。这些因子包括oct3/4和rex-1。还发现了LIF-R(在小鼠中)和转录因子sox-2和rox-1。非ES细胞也表达rox-1和sox-2。ES细胞的一个标志是端粒酶活性，该酶向这些细胞提供了体外无限自我更新的可能。参见如美国专利Nos.5,453,357；5,656,479；5,670,372；5,843,780；5,874,301；5,914,268；6,110,739；6,190,910；6,200,806；6,432,711；6,436,701，6,500,668；6,703,279；6,875,607；7,029,913；7,112,437；7,145,057；7,153,684和7,294,508，所述专利的每一篇都以引用的方式纳入本文中以教导ES细胞及其制备方法。已经以聚集体的形式培养ES细胞。当不附着在基底上培养时，ES细胞能够形成拟胚体。

Oct3/4(oct3在人中)是在原肠形成前期胚胎、卵裂早期胚胎、卵泡内细胞团细胞和胚胎癌(EC)细胞中表达的转录因子(Nichols et al.，Cell95：379-91(1998))，并在细胞被诱导分化时下调。oct3/4的表达对决定胚胎发生和分化的早期步骤起重要作用。oct3/4——连同rox-1——引起锌指蛋白rex-1的转录激活，同时也是保持未分化ES细胞所必需的(Rosfjordand Rizzino，Biochem Biophys Res Commun 203：1795-802(1997)；Ben-Shushan et al.，MoI Cell Biol 18：1866-78(1998))。此外，在ESC/EC中表达而且在其他分化程度更高的细胞中表达的sox-2，与oct3/4一起为保持未分化状态所必需的(Uwanogho et al.，Mech Dev 49：23-36(1995))。小鼠ES和原始生殖细胞的保持需要存在LIF。oct3/4基因在人中转录为至少两种剪接变体，oct3A和oct3B。oct3B剪接变体存在于许多分化细胞中，而oct3A剪接变体(以前也命名为oct3/4)据报道对未分化的ES细胞具有特异性。参见Shimozaki et al.Development 130：2505-12(2003)。

发明内容

1.本发明提供一种包含细胞聚集体的组合物，其中所述细胞聚集体包含不是胚胎干细胞、胚胎生殖细胞或生殖细胞并可分化为内胚层、外胚层和中胚层胚细胞系中至少两种细胞类型的细胞。

2.本发明还提供一种包含细胞培养中的细胞聚集体的组合物，其中所述细胞聚集体包含不是胚胎干细胞、胚胎生殖细胞或生殖细胞并可分化为内胚层、外胚层和中胚层胚细胞系中至少两种细胞类型的细胞。

3.本发明还提供一种包含可药用载体和细胞聚集体的药物组合物，其中所述细胞聚集体包含不是胚胎干细胞、胚胎生殖细胞或生殖细胞并可分化为内胚层、外胚层和中胚层胚细胞系中至少两种细胞类型的细胞。

4.本发明还提供一种包含源自细胞聚集体的细胞的组合物，其中所述细胞聚集体包含不是胚胎干细胞、胚胎生殖细胞或生殖细胞并可分化为内胚层、外胚层和中胚层胚细胞系中至少两种细胞类型的细胞。