[发明专利]脑膜炎球菌fHBP多肽

说明书

技术领域

本发明属于免疫领域，具体地说，属于对奈瑟球菌属致病菌，如脑膜炎奈瑟球菌(N.meningitidis)所导致疾病的免疫。

背景技术

脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)是一种革兰阴性荚膜菌，其寄居于约10％人群的上呼吸道中。虽然已有针对血清群(serogroup)A、C、W135和Y的多糖和偶联疫苗，但是该方法不能用于血清群B，因为其荚膜多糖多聚唾液酸聚合物是人类的一种自身抗原。为了开发针对血清群B的疫苗，业已采用了其外膜囊泡(OMV)中所含的表面暴露蛋白质。这些疫苗可以引发血清杀菌抗体应答并保护机体抵抗疾病，但不能诱导菌株间交叉保护力[1]。于是一些研究者将注意力集中到脑膜炎球菌特异性抗原在疫苗中的用途[2]。一种这样的抗原是脑膜炎球菌H因子结合蛋白(fHBP)，也称为“741”蛋白[参考文献3中的SEQ ID 2535和2536，本文中的SEQ ID1]，“NMB1870”、“GNA1870”[参考文献2之后的参考文献4-6]，“P2086”、“LP2086”或“ORF2086”[7-9]。该脂蛋白在所有的脑膜炎球菌血清群中均有表达，已发现其存在于多种脑膜炎球菌菌株中。fHBP序列可分为三个家族[4](本文中称为家族I、II和III)，已发现抗某给定家族的血清对同一家族菌株具有杀菌作用，但对表达其它两个家族之一的菌株无活性，即在家族内有交叉保护作用，而家族间无交叉保护作用。因此，为了用fHBP来获得菌株间交叉保护作用，采用了一个以上的家族。为了避免表达和纯化各自蛋白质的需要，已提议将不同的家族蛋白质表达为杂合蛋白质[10-12]，将两个或三个家族包括在单个多肽链中。参考文献13和14描述了多种基于突变修饰fHBP序列的方法，以增强其对家族I、II和III之间的覆盖度。

本发明的目的之一是为克服fHBP所赋予保护作用的家族特异性提供进一步的改进方法，以及用这些方法提供对脑膜炎球菌疾病和/或感染，特别是对血清群B的免疫力。

发明内容

菌株MC58的全长fHBP具有以下氨基酸序列(SEQ ID NO：1)：

MNRTAFCCLSLTTALILTACSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKN

EKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSA

LTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLT

YTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGG

KAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ

成熟的该脂蛋白缺少SEQ ID NO：1的前19个氨基酸，fHBP的ΔG形式缺少前26个氨基酸。

MC58序列(SEQ ID NO：1)属于fHBP家族I。采用MC58序列引发的抗体对MC58菌株有高杀菌活性，但对表达家族II或III fHBP菌株的活性则低得多。在一些实施方式中，本发明涉及fHBP的修饰形式，其中的修饰作用增强了该蛋白引发家族间交叉杀菌抗体的能力。在其它实施方式中，本发明涉及能天然引发家族间交叉杀菌抗体的fHBP形式。因此本发明提供了一种多肽，其包含一段选自以下：SEQ ID NO 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76和77的氨基酸序列。这些氨基酸序列起始于与MC58序列Val27匹配的残基，但在下游位点包含各种氨基酸修饰。

两个优选的序列是SEQ ID NO 20和23。也优选SEQ ID NO：76。

所述多肽给予宿主动物后具有诱导杀菌性抗脑膜炎球菌抗体的能力，在优选的实施方式中，可以诱导对fHBP I-III三个家族各自菌株的杀菌性抗体。关于杀菌应答的其它信息在下文中给出。