[发明专利]能够以协同方式引起基因表达转录后沉默的方法和组合物

权利要求书

1.一种包括一个或多个容器的组合物或者一个试剂盒部分，其包括：

(i)第一组分，其包括至少一个U1 snRNA或者编码U1 snRNA的多聚核苷酸，其中所述U1 snRNA在其与内含子的5’末端的GU共有序列的结合序列内被修饰，使得其特异性结合到靶mRNA前体的3’末端外显子的预选区域，并能够抑制所述靶mRNA前体的加工；和

(ii)第二组分，其包括至少一个基因表达沉默剂，该沉默剂特异性靶向于由mRNA前体加工而来的mRNA的预选区域，mRNA前体是(i)中所定义的U1 snRNA的靶标，并且能够导致所述靶mRNA在体内的沉默。

2.根据权利要求1所述的组合物或试剂盒，其中包括在第二组分内的沉默剂选自于以下组中：

(i)siRNA

(ii)miRNA

(iii)shRNA

(iv)编码根据(i)、(ii)、(iii)的试剂的多聚核苷酸，和

(v)根据(i)到(iv)的一个或多个试剂的组合。

3.根据权利要求2所述的组合物或试剂盒，其中组分(ii)是包括编码至少一个shRNA序列的多聚核苷酸。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物或试剂盒，其中，组分(i)包括多个编码U1 snRNA的多聚核苷酸，该U1 snRNA在其与内含子的5’末端的GU共有序列的结合序列内被修饰，使得其特异性结合到相同靶mRNA前体的不同的预选区域，和/或组分(ii)包括多个基因表达沉默剂，所述沉默剂特异性靶向作用于来自mRNA前体的加工的mRNA的不同的预选区域，该mRNA前体是(i)中所定义的U1snRNA的靶标，并能够导致所述靶mRNA的体内沉默。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物或试剂盒，其中第二组分是编码沉默剂的多聚核苷酸，其中所述多聚核苷酸和形成第一组分的多聚核苷酸形成单个载体的一部分。

6.根据权利要求5所述的组合物或试剂盒，其中所述单个载体是病毒载体。

7.根据权利要求6所述的组合物或试剂盒，其中病毒载体选自由腺病毒、腺有关病毒、逆转录酶病毒、慢病毒、疱疹病毒、SV40和α病毒组成的组中。

8.一种多聚核苷酸，其包括：

(i)编码至少一个U1 snRNA的序列，U1 snRNA在它与内含子的5’末端的GU共有序列的结合序列内被修饰，使得其特异性的结合到靶mRNA前体的3’末端外显子的预选区域，且其能够抑制靶mRNA前体的加工，和

(ii)编码沉默剂的序列，该沉默剂特异性靶向作用于由mRNA前体的加工而来的预选区域，mRNA前体是由(i)中所定义的多聚核苷酸编码的U1snRNA的靶标，并能够导致所述靶mRNA的体内沉默。

9.根据权利要求8所述的多聚核苷酸，其中编码沉默剂的序列包括至少一个siRNA的有义链和反义链，编码至少一个miRNA前体或者编码至少一个shRNA。

10.根据权利要求8或9所述的多聚核苷酸，其中序列(i)和(ii)可操作的连接到表达调控区域。

11.根据权利要求10所述的多聚核苷酸，其中序列(i)和(ii)的表达调控序列是不同的。

12.一种包括根据权利要求8至11中任一项所述的多聚核苷酸的表达载体。

13.根据权利要求12所述的载体，其中表达载体是病毒载体。

14.根据权利要求13所述的载体，其中病毒载体选自由腺病毒、腺有关的病毒、逆转录酶病毒、慢病毒、疱疹病毒、SV40和α病毒组成的组中。

15.一种包括根据权利要求12至14所述的载体的细胞。

16.一种非人的转基因动物，其包括整合到其基因组内的根据权利要求8至11中任一项所述的多聚核苷酸、根据权利要求12至14中任一项所述的载体或根据权利要求15所述的细胞。

17.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物或试剂盒，根据权利要求8至11中任一项所述的多聚核苷酸，根据权利要求12至14中任一项所述的载体或根据权利要求15所述的细胞在医药中的用途或作为药物的用途。