[发明专利]SPT事件侧翼的植物基因组DNA及用于鉴定SPT事件的方法有效
申请号: | 200980113123.3 | 申请日: | 2009-02-16 |
公开(公告)号: | CN102119216A | 公开(公告)日: | 2011-07-06 |
发明(设计)人: | 肯特·布灵克;埃兰·克罗盖;尼娜·迪耶特里希;大卫·洪德莱德;乔舒亚·K·永;仲晓燕 | 申请(专利权)人: | 先锋国际良种公司;纳幕尔杜邦公司 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;A01H5/00 |
代理公司: | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人: | 王达佐;洪欣 |
地址: | 美国依*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | spt 事件 侧翼 植物 基因组 dna 用于 鉴定 方法 | ||
1.用于鉴定生物样品中事件E6611.32.1.38的方法,其包括使用特异性识别SEQ ID NO:1的T-DNA插入物内的序列的探针或第一引物和特异性识别SEQ ID NO:1的任一侧翼序列内的序列的另一探针或第二引物检测E6611.32.1.38特异区。
2.如权利要求1所述的方法,其还包括使用利用至少两条引物的聚合酶链式反应,从所述生物样品中存在的核酸扩增DNA片段,其中所述第一引物识别SEQ ID NO:1的T-DNA插入物内的序列,并且第二引物识别SEQ ID NO:1的任一侧翼序列内的序列。
3.如权利要求2所述的方法,其中所述第一引物选自SEQ ID NOS:7、9、10、11、12、13和14,并且所述第二引物选自SEQ ID NOS:6、8、15、16、17、18和19。
4.检测生物样品中事件E6611.32.1.38或其子代的存在的方法,其包括:
(a)从所述生物样品提取DNA样品;
(b)提供DNA引物对,其中所述引物中的一条识别SEQ ID NO:1的任一侧翼序列内的序列,并且所述引物中的另一条识别SEQ ID NO:1的T-DNA插入物内的序列;
(c)提供DNA扩增反应条件;
(d)进行DNA扩增反应,从而产生DNA扩增子分子;和
(e)检测所述DNA扩增子分子,其中所述DNA扩增子分子在所述DNA扩增反应中的检出表明事件E6611.32.1.38的存在。
5.分离的DNA分子,其包含通过权利要求4所述方法产生的任一扩增子。
6.检测样品中对应于E6611.32.1.38事件的DNA的存在的方法,所述方法包括:
(a)将包含DNA的样品与多核苷酸探针接触,所述多核苷酸探针在严紧杂交条件下与来自事件E6611.32.1.38的DNA杂交并且在所述严紧杂交条件下不与非E6611.32.1.38植物DNA杂交;
(b)使所述样品和探针处于严紧杂交条件;和
(c)检测所述探针与所述DNA的杂交,其中杂交的检出表明E6611.32.1.38事件的存在。
7.分离的DNA核苷酸引物序列,其包含选自SEQ ID NOS:2、3、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19的序列或其互补物。
8.分离的DNA分子,其包含由SEQ ID NO:6和7;或SEQ ID NO:8和9;或SEQ ID NO:14和15的引物对扩增的接合(junction)序列。
9.用于筛选种子的事件E6611.32.1.38的存在的方法,其包括使用特异性引物或探针的E6611.32.1.38特异区的检测,所述引物或探针特异性识别事件E6611.32.1.38的接合(junction)序列。
10.分离的DNA序列对,每一所述DNA序列包含至少10个核苷酸并且当在DNA扩增程序中共同使用时,会产生对于事件E6611.32.1.38是诊断性的扩增子。
11.如权利要求10所述的分离的DNA序列对,其中所述对的第一成员选自SEQ ID NOS:7、9、10、11、12、13和14,并且所述对的第二成员选自SEQ ID NOS:6、8、15、16、17、18和19。
12.如权利要求5所述的扩增子,其中所述扩增子具有SEQ ID NO:25、28或32的序列。
13.包含事件E6611.32.1.38的植物。
14.由权利要求13所述植物产生的种子。
15.转基因植物、细胞、组织、种子或其含有DNA的部分,其代表性种子已经以登录号PTA-9158保藏于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)。
16.植物或其含有DNA的部分,所述植物或其含有DNA的部分包含SEQ ID NO:1的核苷酸2115至11996的DNA插入物。
17.植物或其含有DNA的部分,所述植物或其含有DNA的部分包含SEQ ID NO:1的核苷酸2071至2170的DNA。
18.植物或其含有DNA的部分,所述植物或其含有DNA的部分包含SEQ ID NO:1的核苷酸11951至12050的DNA。
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