[发明专利]与急性髓性白血病(AML)中的细胞遗传学和预后相关的微RNA特征及其用途

说明书

发明者：Carlo M.Croce，Ramiro Garzon

交叉参考相关申请

本申请要求2008年2月28日提交的美国临时申请案61/067,419的权益，其全部公开内容明确地通过引用合并入本文。

关于联邦政府支助的研究的声明

本发明是在NCI基金CA76259和CA8134下由政府支助进行的。政府在本发明中具有某些权利。

本发明的技术领域和工业适用性

本发明总地说来涉及分子生物学领域。本发明的某些方面包括在白血病相关病症的诊断、治疗和预后中的应用。

发明背景

不承认本部分中公开的背景技术在法律上构成了现有技术。

急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是特征在于克隆性髓系前体细胞(clonal myeloid precursor)的分化停滞和恶性增殖的在细胞遗传学上和分子上异质的病症(1)。具有中等风险和高风险的细胞遗传学的患者代表大多数AML；基于化学疗法的方案不能治愈大部分此类患者，并且干细胞移植是通常选择的治疗(2，3)。由于众多原因异基因干细胞移植不适合于许多高危白血病患者，因此存在对提高我们对此类白血病的生物学的理解以开发新型疗法的急切需要。

微RNA(miRNA)是长度为19至25个核苷酸的非编码RNA，其通过诱导翻译抑制和切割它们的靶mRNA(经由与部分或完全互补位点碱基配对)来调控基因表达(4)。miRNA参与至关重要的生物学过程，包括发育、细胞分化、压力应答、细胞凋亡和增殖(4)。最近，已将miRNA的表达与造血作用和癌症相关联(5-11)。在小鼠中，miR-181在造血祖细胞中的异位表达导致B细胞区室中的增殖(5)。同样，已在人粒细胞、红细胞和巨核细胞的分化过程中发现miRNA的重要作用(6-8)。将miRNA与癌症相关联的第一个报导涉及慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(9)。已发现2个miRNA(miR-15a和miR-16-1)的簇位于13q14上的最小缺失区域(约30kb)中，并且在大约60％的CLL样品中缺失或下调(9)。其他研究确认，miRNA广泛参与癌症(10，11)。然而，关于AML中的miRNA表达，知之甚少。

尽管对治疗此类疾病的疗法进行了相当多的研究，但仍然难以有效地诊断和治疗它们，并且在患者中观察到的死亡率表明，需要改进所述疾病的诊断、治疗和预防。

发明概述

在第一广泛的方面，本文中描述了……………。

在确定权利要求后，我们将在此处插入权利要求的概述………………………。

当根据附图进行阅读时，根据下列优选实施方案的详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员将变得显然。

附图概述

本专利或申请文件可包括一个或多个以彩色制成的图和/或一个或多个照片。具有彩色附图和/或照片的本专利或专利申请公开案的拷贝将应请求且支付必要的费用后由专利局(Patent Office)提供。

图1：相对于CD34⁺细胞和成熟的造血前体细胞(hematopoietic precursor)，在AML样品中下调的miRNA。

图1A，图1B：我们根据SAM评分和倍数变化选择差异最大的miRNA并且通过定量RT-PCR在6个AML患者和获自健康供体的4个CD34样品的随机组中测量它们。在用let-7i进行标准化和2^ΔCt转换(18)后，结果表示为相对于一个健康供体的CD34⁺表达，AML样品中miRNA表达的倍数变化(细棒代表标准差)。根据t检验，除了miR-135外(P＝.38)，4个CD34与所有6个AML患者之间miRNA表达的差异在统计学上是显著的：miR-106a(P＝.001)、miR125a(P＝.001)、miR-126(P＝.001)、miR-93(P＝.001)、miR-130a(P＝.006)、miR-146(P＝.001)。

图1C：在标准化和2^ΔCt转换后，与CD34⁺细胞的平均miRNA表达相比较的外周血成熟粒细胞和单核细胞以及骨髓定向(红细胞和巨核细胞)前体细胞的平均miRNA表达(来自4个不同的健康供体)和6个AML患者的平均miRNA表达。结果表示为相对于CD34⁺细胞，平均miRNA表达的倍数变化。根据t检验(P＜.05)，相对于CD34细胞，成熟外周血细胞和定向前体细胞中mi RNA表达的下调在统计学上是显著的。