[发明专利]用于治疗登革热的疫苗组合物和其用途

说明书

发明领域

本发明属于医学、公共健康、免疫学、分子生物学和病毒学领域。本发明提供了用于治疗、改善和/或预防登革热的组合物、疫苗组合物和药物组合物。本发明的组合物、疫苗组合物和药物组合物包含RNA噬菌体的病毒样颗粒和至少一种抗原，其中所述至少一种抗原是登革热抗原。当施用给动物、优选人类时，所述组合物、疫苗组合物和药物组合物诱导有效的免疫应答，特别是抗体应答，其中典型地和优选地，所述抗体应答针对登革热病毒，优选针对血清型1到4的任一种的登革热病毒。因而，本发明进一步提供了通过针对登革热病毒包膜蛋白质E的结构域III、或针对其抗原片段的主动免疫法来治疗、改善和/或预防登革热病毒感染的方法。

发明背景

登革热感染是主要的公共健康难题。每年有约5千万-1亿例登革热、500,000例登革热出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)，超过20,000例死亡。大多数感染是无症状的，或引起非致命的虚弱性疾病，但是特别是儿童常常经历更为致命的DHF和DSS形式。如果通过输液来替代失去的体液，死亡率可以降低到低于1％。主要的登革热载体是蚊子(Aedes aegypti，埃及伊蚊)，其在整个热带中存在。由于没有特异性的治疗，控制登革热的仅有方法是消灭蚊子。

登革热病毒属于黄病毒科(Flaviviridae)。存在四种紧密相关的登革热血清型(血清型1到4)。黄病毒具有50nm的直径，且含有单链RNA基因组，该单链RNA基因组被两种糖蛋白组成的颗粒表面上的衣壳、脂双层和二十面体壳围绕。单个开放阅读框编码长的多聚蛋白，其被切成三种结构蛋白(核衣壳蛋白C、膜前体蛋白prM和包膜蛋白E)和七种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。prM和NS1已经成为中和抗体的靶点(Kaufman等人1989 Am.J.Trop.Med.Hyg.41(5)：576-580；Henchal等人1988J.Gen.Virol.69：2101-2107；Wu等人2003Vaccine 21：3919-3929)，但是许多研究也集中于包膜蛋白E。在成熟病毒粒中，E是膜相关的同型二聚的糖蛋白，其介导病毒附着和与目标细胞上的细胞受体的相互作用。解析了E的可溶的胞外结构域的晶体结构(Modis等人2003 Proc.Natl.Acad.Sci.USA.100：6986-6991)，显示了包含三个结构域：结构域I位于中央，结构域II含有融合肽和二聚作用区域，结构域III赋予受体结合活性。

已经提出登革热包膜结构域III含有中和表位(Roehrig等人1990Virology 177：668-675；Megret等人1992 Virology 187：480-491；Trirawatanapong等人1992 Gene 116：139-150)。由于没有特异性的治疗，疫苗接种仍然是控制登革热感染的最有前途的途径(Ray和Shi，2006 Recent Patents Anti-Infect Drug Disc.1：45-55)。

Sugrue等人1997(J.Gen.Virol.78：1861-1866)已经在巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)中表达了登革热病毒结构蛋白(C-prM-E)。通过SDS-PAGE和透射电子显微术来检查出芽病毒样颗粒，其中它们观察球状构造，其形态类似于登革热病毒粒。病毒样颗粒在动物中是免疫原性的，能够诱导中和抗体。

带有DEN-2-特异性表位的细小病毒B19(非包膜的、单链DNA病毒)病毒样颗粒(VLP)被用作抗原载体(Amexis和Young，2006J.Infect.Dis.194：790-794)。包膜糖蛋白的结构域III的两种肽(残基352-368和386-397)和全长结构域III作为B19 VLP上的重组融合物来展示。

在另一项研究中，显示的是，登革热包膜蛋白(残基1-395)可以在酵母中作为与乙型肝炎表面抗原的融合蛋白来表达(Bisht等人2002J.Biotechnol.99：97-110)。来自免疫的小鼠的血清显示了其结合到包膜蛋白和登革热感染的细胞。

在又一项研究中，在小鼠中单独地和作为四价疫苗候选物，评估了含有融合到大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)的登革热病毒血清型1-4的B结构域的重组蛋白质(Simmons等人2001 Am.J.Trop.Med.Hyg.65：159-161)。

发明概述