[发明专利]源自ZEBRA蛋白的合成肽用于EB病毒(EBV)再激活的体外诊断的用途

说明书

本发明涉及源自ZEBRA蛋白的合成肽用于EB病毒(EBV)再激活的体外诊断的用途。本发明特别涉及用于测定IgG抗体水平以便诊断EBV再激活的方法。

EB病毒(EBV)是在人B淋巴细胞中建立潜伏感染，有效地将所述细胞转化为类淋巴母细胞系(LCLs)的γ-疱疹病毒，并且牵涉传染性单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤(BL)、霍奇金病、鼻咽癌(NPC)和免疫受损个体中的淋巴组织增生性疾病的病因学(Epstein MA和Crawford DH，2005；Klein G，2005；Cohen JI，2005)。

虽然原发感染常常伴随有自限性的临床病患期，但长期潜伏是无症状的。在激活后，病毒基因的转录从潜伏期转换成裂解期，这导致增强的复制和病毒产生。该病毒能够采取4个潜伏程序(潜伏期0、I、II和III)。

在健康个体中，潜伏性EBV感染看起来主要局限于静止的记忆B细胞(Babcock等人，1998)。在这些细胞中一致检测出的仅有的EBV基因产物是(i)潜伏膜蛋白LMP1和LMP2A/2B，(ii)EBNAs(EB核抗原)，这限定了目前称为潜伏期的基因表达模式(Thorley-Lawson等人，1996)。

在伯基特淋巴瘤活组织检查中，仅EB病毒核抗原1(EBNA1)被表达(潜伏期I)。在霍奇金病、NPC和T细胞淋巴瘤中，EBNA1以及潜伏膜蛋白家族的三个成员(LMP1、LMP2A和LMP2B)的各种组合被表达(潜伏期II)。在急性传染性单核细胞增多症期间，在免疫受损个体中的淋巴组织增生性综合征之中以及在体外建立的LCLs之中，所有6种核抗原(EBNA1-6)都被表达(潜伏期III)。此外，所有3种LMPs都被表达。被EBV感染的细胞系要么对于病毒颗粒而言是完全非生产性的，要么包含小亚群的已从感染的潜伏阶段自发转换入裂解周期的细胞。

转换的机制未充分了解，但在病毒基因表达中首先可检测的变化之一是EBV立即早期基因BZLF1的激活，所述BZLF1编码裂解转换反式激活蛋白ZEBRA(Flemington等人，1991)。然后，ZEBRA，与BRLF1基因的蛋白质产物一起，起始裂解周期级联(Feederle等人，2000)。

EBV-阳性的成人(免疫学上健康的或免疫抑制的)呈现出相同水平的EBV病毒裂解性复制(Hong等人，2005；Montone等人，1996)。病毒的这种活跃复制可能是终生持续所需的。

尽管免疫活性个体可以限制被EBV感染的细胞的增殖，并且常常展现出标准化的血清学特性谱，但是具有先天性或获得性免疫缺陷的个体对于与EBV相关的淋巴组织增生是高度易感的。

ZEBRA蛋白(SEQ ID NO 6)是转录因子并且包含3个功能结构域，所述3个功能结构域由反式激活蛋白结构域(氨基末端部分)、DNA结合结构域和二聚化结构域(在该蛋白质的羧基末端部分处)组成。

ZEBRA是高度免疫原性蛋白质，并且包含许多可能被抗体识别的表位。

某些研究公开了ZEBRA蛋白用于检测EBV再激活的用途：

Drouet等人(Drouet等人，1999)公开了ZEBRA蛋白用于霍奇金病检测的用途。ZEBRA允许以剂量依赖性方式检测患者血清中针对ZEBRA的抗体。

Touge等人(Touge等人，2006)和Tedeschi等人(Tedeschi等人，2006)分别公开了使用ZEBRA以检测罹患葡萄膜炎或白血病的患者中的EBV再激活。

Dardari等人(Dardari等人，2001)公开了使用ZEBRA以及p54和p138蛋白以用于增强EBV再激活。

尽管所有前述文件公开了使用ZEBRA蛋白来检测EBV再激活的方法，但是这些文献中没有一个提及ZEBRA的片段可以用于提供用于检测EBV再激活的方法。

在ZEBRA表位中，已鉴定出了2种包含ZEBRA的主要免疫原性区域的主要多肽，P130 ZEBRA和P125 ZEBRA。P130 ZEBRA相应于ZEBRA蛋白的氨基酸157-195，而P125相应于ZEBRA蛋白的氨基酸59-93。

在感染过程期间产生的抗体之中，在称为EBV再激活的特定过程期间检测出针对ZEBRA蛋白而产生的抗体(Maréchal等人，1993；Joab等人，1991；Brousset等人，AIDS 1994)。

早在该病毒自身于1964年被发现之前，血清学已成为在诊断EBV感染中的重要帮助。EBV感染产生针对结构和非结构的各种抗原的广泛多样的抗体(Henle W和Henle G，1981)。